[发明专利]一种鸡传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗的制备和应用

权利要求书

1.一种重组表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位的方法，其特征 在于，该方法包括：

(1)提供改造的VP2蛋白亚单位编码基因；其中，在所述的VP2蛋白亚单 位编码基因的5’端起始密码子ATG之前添加蛋白酶KEX2的切割序列，在所 述的VP2蛋白亚单位编码基因的3’端添加终止密码子序列；

(2)将(1)所述的VP2蛋白亚单位编码基因插入到酵母表达载体pPICZαA 的α-factor信号肽编码序列下游，获得重组表达载体；

(3)将(2)的重组表达载体电转化毕赤酵母X-33菌株，获得重组的毕赤酵 母细胞；电转化条件为：0.2cm电转杯，电压2.0KV，电击时间5ms，质粒浓 度为7-10μg/10μL，感受态细胞100μL；电转化后快速加入1mL1M山梨糖醇， 30℃复苏1小时；

(4)将(3)的重组的毕赤酵母细胞进行重组表达，表达条件为：采用诱导培 养基BMMY，培养基PH值为6.5±0.5，诱导温度为28.5±1℃，甲醇终浓度为 0.5±0.2%(v/v)；从表达上清中获得鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位；

步骤(1)中，还在所述的蛋白酶KEX2的切割序列的5’端之前添加XhoI 酶切位点序列；在所述的终止密码子序列的3’端添加NotI酶切位点序列；

所述的改造的VP2蛋白亚单位编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述的VP2蛋 白亚单位编码基因插入到酵母表达载体pPICZαA的XhoI/NotI酶切位点之间。

3.一种制备传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位疫苗的方法，其特征在 于，该方法包括：

以权利要求1所述的方法获得鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位，进 行乳化，获得传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位疫苗。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的乳化是将所述的鸡传染 性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位与白油司本进行混合、乳化。

5.一种用于重组表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位的多核苷酸， 其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。