[发明专利]一种苦马豆素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，特别是涉及一种苦马豆素的制备方法。

背景技术

苦马豆素是一种吲哚类生物碱，化学名是1，2，8—三羟基八氢吲哚兹啶，高纯度苦马豆素为白色针状结晶，熔点144℃-145℃，分子式C₈H₁₅NO₃，分子量173，酸解离常数7.4，易溶于水。

苦马豆素是最初从灰苦马豆中分离出来一种毒性成分，是导致动物中毒的疯草的主要成分。现代医学研究表明，苦马豆素能激活动物腹腔吞噬细胞的细胞结合活性，从而可抑制肿瘤细胞，对治疗肿瘤、感染性疾病、免疫抑制性疾病有重要意义。最新研究表明，苦马豆素能有效逆转致死性辐照或高剂量化疗所造成的骨髓抑制。在世界范围内，苦马豆素作为一种新的天然抗肿瘤药物越来越受到重视。文献“苦马豆素研究进展”和《陕西日报》对其做了详细论述。

当前，苦马豆素的来源主要有三类：一是从微生物菌丝体或发酵液中进行提取；二是化学合成；三是从植物中提取。微生物发酵和化学合成反应条件苛刻和繁琐，很难批量生产。从植物中制备，原料是一种毒草，而且易得，是一种变废为宝的做法。

疯草包括棘豆属和黄芪属两属有毒植物，国内外均有广泛分布。在我国主要分布于西北、西南、华北的主要牧区。家畜采食后可引起中毒、死亡、流产等危害。

现有从植物中提取苦马豆素方法，多采用有萃取法和硅胶柱分离。如“疯草中苦马豆素提取的提纯工艺”（专利申请号：02114590.3）公开的方法是采用阳离子交换法提取出大极性生物碱粗品，再用碱性氯仿抽提，抽提部分经硅胶柱层析分离得到苦马豆素粗品，最后分步升华获得苦马豆素纯品。但是生产中会产生了很多酸、碱废水污染严重，硅胶柱分离重现性差。还有 “从甘肃棘豆中分离提取苦马豆素的工艺方法”（专利申请号：200610104918.3）该方法也是采用硅胶柱分离纯化。而“一种从豆科棘豆属或黄芪属植物中提纯苦马豆素的工艺”（专利申请号：200810018178.3），该专利公开的方法是先超声进行提取，再过大孔树脂分离粗品，最后用升华的方法获得精品。但是工艺采用水提取，也是存在污染严重问题。专利（专利申请号：200710017542.X）“连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺”，该专利公开的方法是采用大孔树脂、硅胶柱和高效液相连续柱层析，得到苦马豆素。该方法工业操作复杂，制备量较小。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种苦马豆素的制备方法。

本发明目的是通过以下技术方案来实现的：

一种苦马豆素的制备方法，其特征在于：将疯草原料粉碎，加入甲醇浸泡提取2-3次，每次提取2-3小时，提取液进行浓缩，浓缩后加水进行分散，然后过滤，滤液加入大孔树脂柱，收集柱通过液减压浓缩，浓缩液加适量氨水，用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩至小体积，以氯仿-甲醇-丁醇-水作为溶剂系统，采用高速逆流色谱分离，收集流分回收试剂，真空干燥即得产品。

所述的甲醇浸泡提取条件为：甲醇为80-90%甲醇溶液，提取温度为45-55℃。

所述的大孔树脂可选非极性大孔树脂。

所述的高速逆流色谱分离条件为：溶剂系统为氯仿-甲醇-丁醇-水，比例30-25:1:17:12，上相为流动相，下相为固定相，转速800-950r/min，流速1-4ml/min。   

本发明优点是：采用高浓度甲醇热浸提取可以减少极性物质的溶出，有利于纯化，减少废水的产生；大孔树脂纯化，利用水溶性生物碱在大孔树脂中不吸附的原理，吸附杂质，简化了后续纯化步骤；高速逆流色谱分离，样品无损失，制备量大，重现性高，还不产生废液。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

疯草原料粉碎20目，取2kg，加入10L80%甲醇加热到45℃保温提取3小时，滤出液体，再加10L80%甲醇提取3小时，合并提取液浓缩至无醇，加适量的水进行分散，过滤，滤液加入HPD100大孔树脂柱，收集柱通液，减压浓缩，浓缩液加氨水调节pH至10，然后加入200mL二氯甲烷进行萃取，萃取2次，萃取液浓缩至小体积。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶剂，按比例27:1:17:12混合，取上相为流动相，下相为固定相，把固定相注入高速逆流色谱仪柱内，开启机器，调节主机转速800r/min，流速1ml/min，注入样品分离，收集目标成分，真空减压干燥得白色苦马豆素83mg，含量99.2%。