[发明专利]磁珠法提取细菌质粒DNA的试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种磁珠法提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征是：其包括菌体重悬液、裂解液、中和液、磁珠结合液、洗涤液和洗脱液六种组分，各组分的内容如下：

菌体重悬液：40～60mmol/L葡萄糖，PH7.6～8.4、20～30mmol/L Tris，PH7.6～8.4、5～15mmol/L EDTA，95～115℃灭菌10～30min，2～4℃保存；

裂解液：0.15～0.3mol/L NaOH，质量浓度0.8～1.6% 的SDS；

中和液：4～5mol/L乙酸钾，4.5～5.5mol/L冰乙酸；

磁珠结合液：95～105ml异丙醇，3.5～4.5ml磁珠混悬液，二者混合配制成混悬液，其中磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比混合配置而成；

洗涤液：由20～30mmol/L Tris，8～13mmol/L EDTA，140～160mmol/L Na盐和无水乙醇混合组成，其中Tris、EDTA、Na盐与无水乙醇的价体积比为30%：70%；

洗脱液：6～10mmol/L Tris，PH8.0～8.5。

2.根据权利要求1所述的磁珠法提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征是：所述磁珠混悬液中的磁珠粒径为2～6微米。

3.根据权利要求1所述的磁珠法提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征是：所述各组分中采用的水为蒸馏水、双蒸水或去离子水，其中洗脱液中采用双蒸水。

4.一种权利要求1所述的试剂盒提取方法，其特征是：其包括以下步骤：

步骤1、取常规方法培养过夜的细菌培养液1～1.5ml，加入到离心管中，离心12000～15000r/min，5～10min，收集菌体，加入50～150μl菌体重悬液，振荡5～10秒钟，重悬菌体；

步骤2、向重悬菌体中加入100～150μl裂解液，上下颠倒离心管4～8次混匀，持续时间2～3分钟，直至溶液变粘稠但清澈可见；

步骤3、向步骤2得到的裂解产物中加入50～100μl中和液，立即上下颠倒离心管3～7次，至溶液出现絮状物沉淀，离心12000～15000 r/min，5～10min，贴近溶液上表面小心吸取上清150～250μl，转移到另一个新的离心管中；

步骤4、向步骤3得到的溶液中加入混匀的磁珠结合液150～300μl，振荡3～7秒钟混匀，室温下放置8～13分钟，然后将离心管放在磁力架上，进行磁分离，吸弃液体，保留磁珠；

步骤5、向步骤4的离心管中加入250～850μl洗涤液，振荡3～7秒钟混匀，放置10～20秒钟，然后用磁力架进行磁分离，彻底吸净离心管上盖及管底的残液，室温下打开管盖干燥磁珠5～10分钟；

步骤6、向步骤5得到的溶液中加入30～150μl洗脱液，抽吸 6～8次混匀，室温下放置10～15分钟或57℃温育7～10分钟，然后进行磁分离，小心吸取上清液转移至新的离心管，即得细菌质粒DNA备用。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征是：步骤4中，在室温下放置过程中每隔2～3分钟将离心管颠倒数次。

6.根据权利要求4所述的提取方法，其特征是：步骤6中，在室温下放置或57℃温育过程中每隔2～3分钟轻摇离心管3～4下。

7.根据权利要求4所述的提取方法，其特征是：所述重悬液和洗脱液储存于2～8℃，其它试剂储存于室温。