[发明专利]一种头孢西酮钠杂质及中间体毒性的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学药物毒性检测领域，尤其是一种头孢西酮钠杂质毒性的毒性检测方法。

背景技术

头孢西酮钠，英文名称：Cefazedone Sodium for Injection，类别：β-内酰胺类抗生素，头孢菌素类，化学结构式如下：

头孢西酮钠是由E.Merck，Darmstadt实验室研究开发的一代头孢菌素，1979年由E.默克公司率先在德国上市，其后在其周边及韩国、罗马尼亚、保加利亚、台湾等国家和地区上市。头孢西酮钠对金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、β-溶血链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、不产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷白杆菌、奇异变形杆菌等有抑制效果。用于呼吸系统、泌尿系统、胃肠道感染及妇科、腹膜、皮肤、软组织和整形外科感染的治疗，具有药效相对较高，毒性相对较小，血药浓度维持时间长的优势。

根据目前国内外耐药监测资料以及临床医师的实际应用情况，一代头孢菌素在治疗国内社区获得性感染，特别是呼吸道感染中革兰阳性菌以及流感嗜血杆菌仍有重要的地位，对门诊患者的有效率可达到79％以上，因此本品在基层医疗机构有着广阔的应用空间。

其次，随着医疗体制改革深化，社区医疗在医疗服务中的比例逐渐增加，国家提倡基本药物治疗，提倡抗菌药分级使用，充分肯定一代头孢菌素对社区感染和围手术期预防的应用，临床上可供选择的一代头孢品种相对较少，需要新品种，而头孢西酮钠的抗菌谱和抗菌活性与头孢唑林相似，药代特征与其它同类产品相比具有一定优势，具有开发的必要性。

安全性评价是新药研发过程中最重要的研究内容之一。药物毒副反应一般来自药品本身的药理活性和药品中杂质的活性。药品本身的毒理活性通常通过严格的药理实验进行评估；而药品中的杂质由于通常几乎不可能完全被去除，故通常通过限度来控制。由于药品中的杂质通常不宜获得，因此很难依据传统的药理实验进行评估。

目前斑马鱼作为一种新的优秀动物模型已愈来愈多的受到关注，斑马鱼作为药物毒理学评价的模式动物具有：①本身为脊椎动物，与人在基因序列、表达规律以及组织器官的形成发育过程相似，可以较好地模拟人类胚胎的体内发育；其组织器官在解剖学、生理学和分子水平上也类似于人类的相应器官。研究表明，哺乳动物90％以上的基因在斑马鱼中具有同源基因，所编码蛋白结构相似而且在生物体内发挥类似的功能；斑马鱼基因组测序工作预计在1-2年内完成，在生物信息学上可与人和小鼠进行比较；因此，以斑马鱼为平台的药物毒理学研究和检测具有较好的代表性和可比性。②斑马鱼可以生存在较小的容器和少量的液体中，通常只需要微克级的化合物便可进行药物毒性筛选，如采用受精卵作为评价对象，实验样品量可进一步降低，因此特别适合对不宜获得大量样品的杂质的评价；③斑马鱼具有较高的产卵量(一对成体鱼可以在一个上午产数百枚受精卵)，可以满足统计学对实验的要求；④斑马鱼的世代周期较短(3-4月)，体外发育迅速(3天完成胚胎的全部发育)且胚体透明，便于随时观察活体胚胎结构，因此适和于快速分析药物对胚胎的多方面的作用，大大提高检测效率；等其他哺乳类模式动物不可及的优点。

目前关于头孢西酮钠杂质的检测方法没有明确一个规定，每个厂家执行的标准也不相同，绝大多数厂家根本不进行杂质毒性的研究，无论对头孢西酮钠的生产还是贮藏都是十分不利的。

发明内容

本发明的目的在提供一种头孢西酮钠杂质毒性的毒性检测方法，头孢西酮钠由于本身结构不稳定，故样品中的杂质含量相对较高，为评价其杂质限度是否合理，我们利用斑马鱼模型对其毒性作用进行了评估。

本发明采用的技术方案是：

一种头孢西酮钠杂质毒性的毒性检测方法，采用斑马鱼TU line Zebrafish，Danio rerio Tuebingen作为药物毒理学评价的动物模型。

而且，步骤为：(1)用人工海水分别稀释供试品溶液，稀释成不同梯度；

(2)选择头孢唑林钠为对照样品；

(3)取40-50％外包期胚胎，浸入3-4ml测试药液中，以斑马鱼饲养液-人工海水为正常对照液，标准环境下孵育，持续3天以上，每天观察记录胚胎发育情况，包括统计发育第3天的畸形和死亡数/存活胚数，直至实验结束。

而且，所述头孢西酮钠杂质包括的制备头孢西酮钠的中间体、制备过程中产生的杂质以及降解产生的杂质。

而且，所述头孢西酮钠杂质包括：