[发明专利]一种采用安培免疫传感器进行夹心免疫反应的二抗探针

权利要求书

1.一种采用安培免疫传感器进行夹心免疫反应的二抗探针，该探针由小牛胸腺DNA分子链和附着在小牛胸腺DNA分子链上的纳米球构成，其中所述的纳米球的表面为酶标记的抗体蛋白，内部为磁性纳米颗粒，该颗粒为在四氧化三铁纳米颗粒表面沉积一层无定形氧化锆形成。

2.权利要求1所述的二抗探针的制备方法，该方法由以下步骤组成：

1)将磁性纳米颗粒加入pH 7.0磷酸盐缓冲液中，再加入重量为磁性纳米粒子0.1倍的辣根过氧化物酶标记抗体，4℃下反应6h，分离得到负载抗体的纳米微球；

2)将所得到的纳米微球加入pH 7.0磷酸盐缓冲液中，再加入重量为所述纳米微球0.1倍的过氧化物酶和重量为所述纳米微球1.0倍的牛血清白蛋白，4℃下反应6h，分离得到纳米球；

3)将纳米球加入pH 7.0磷酸盐缓冲液中，再加入重量为纳米球1.2倍的小牛胸腺DNA，室温下反应6h，分离得到二抗探针。

3.一种采用权利要求1所述的二抗探针测量抗原浓度的方法，该方法由以下步骤组成：

(a)定量标准曲线的制备：

(1)配制一系列不同浓度的抗原标准品溶液；

(2)按相同的体积分别将每一浓度的抗原标准品溶液加入到安培免疫传感器的反应腔中，先37℃温育30min；再将所制备的二抗探针滴加在安培免疫传感器的工作电极表面，37℃温育30min；然后，反应腔中加入含有浓度为5mmol/L过氧化尿溶液和1mmol/L邻苯二酚的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，反应3min后，在电化学工作站上用循环伏安法(CV)或者示差脉冲伏安法(DPV)记录还原峰电流；

(3)将步骤(2)所得到的抗原标准品溶液的浓度及其对应的还原峰电流的一组数据，以还原峰电流对抗原标准品溶液浓度进行线性回归便得到，还原峰电流与抗原标准品溶液浓度对应关系的直线方程，即标准曲线；

(b)样品的检测：

将待测样品加入到安培免疫传感器的反应腔中，以步骤(a)同样的方法和反应条件采用循环伏安法(CV)记录还原峰电流，然后，将检测样品得到的还原峰电流值代入步骤(a)所得到的直线方程中即可算出待测样品中抗原的浓度。