[发明专利]一种利用高速逆流色谱法制备西红花苷-Ⅰ的方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种利用高速逆流色谱法制备西红花苷-I的方法。

背景技术：

西红花苷-I(Crocin I)，分子式C₄₄H₆₄O₂₄，分子量976.96，是类胡萝卜素类的藏花酸与二分子龙胆双糖结合而成的二元酯，分子结构为：

西红花苷-I为棕红状结晶，易溶于热水，呈橙色，稍溶于无水乙醇、乙醚及其他有机溶剂。在黄色体系的天然色素中，西红花苷-I比较稳定，具有耐光、耐热、耐金属离子和耐化学品等特点，色调变化基本上不受pH的影响，尤其是对于蛋白质、淀粉，还具有优良的染色性，而且安全性高。此外西红花苷-I还具有抗氧化、抗肿瘤、降糖降脂和护肝等作用。

栀子黄色素是一种从栀子果实中提取，经过纯化得到的一种天然水溶性色素，栀子黄色素的主要成分为西红花苷和藏红花酸，是一种罕见的水溶性类胡萝卜素，极易被人体吸收，在人体内可以转化为维生素A。可以补充人体维生素的不足，是一种营养型着色剂。在国内外食品工业上广泛应用，是我国批准允许使用的食用天然色素，已列入到我国GB2760-1996《食品添加剂使用卫生标准》中。

西红花苷-I在西红花中含量较高，中国药典2000规定不得少于5％，由于药材价格较高，一般转为从茜草科植物栀子果实中提取分离。现有分离高含量西红花苷-I的方法一般为硅胶柱色谱和制备液相，这些方法操作复杂，制备量较小。如张宏等采用低压液相色谱法制备西红花有效成分西红花苷-I。陈阳等采用采用硅胶柱层析从栀子中分离西红花酸和西红花苷纯品。

发明内容：

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种利用高速逆流色谱法制备西红花苷-I的方法。

高速逆流色谱是一种独特的不用固态载体的液液分配色谱技术，消除了由于样品在固相载体上的不可逆吸附和降解造成的损失，能实现连续有效分离的实用分离制备技术，能采用多种多样的溶剂系统对任何极性范围的样品进行分离，能实现从微克、微升量级的分析分离到上百毫克、数克量级的制备提纯。在天然产物分离纯化上的应用特别广泛。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：取乙酸乙酯、乙醇、水混合分层后，取上相充满高速逆流色谱柱，转动主机，泵入下相做流动相，将栀子黄色素溶于下相由进样阀进样，SP-200紫外检测器检测，根据图谱收集目的成分，减压干燥流分，即得。

栀子黄色素优选色价400以上的产品。

主机转动速度可为700-1200rpm，流动相流速控制在1-4ml/min。

所述的乙酸乙酯、甲醇、水混合比为5-7∶3-4∶4-5。

本发明利用高速逆流色谱法从栀子黄色素中分离西红花苷-I方法，分离速度快、分离量大、样品无损失，克服了硅胶柱死吸附和制备液相分离量小的缺陷，同时在制备过程中不产生污染物，可以实现西红花苷-I的连续化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取乙酸乙酯、乙醇、水，按7∶4∶5比例混和，在分液漏斗中静置12小时，分取上下相。取上相注满高速逆流色谱柱，转动主机，转速700rpm，泵入下相做流动相，待有流动相流出时，调整流速为4ml/min，同时取流动相溶解色价400的栀子黄色素1g，由进样阀进样，SP-200紫外检测器检测，根据图谱收集目的成分，减压浓缩流分真空干燥，得棕红色粉末，经质谱、核磁共振、红外分析为西红花苷-I、含量为98.7％。

实施例2：

取乙酸乙酯、乙醇、水，按5∶3∶4比例混和，在分液漏斗中静置8小时，分取上下相。取上相注满高速逆流色谱柱，转动主机，转速1200rpm，泵入下相做流动相，待有流动相流出时，调整流速为2ml/min，同时取流动相溶解色价400的栀子黄色素1g，由进样阀进样，SP-200紫外检测器检测，根据图谱收集目的成分，减压浓缩流分真空干燥，得棕红色粉末西红花苷-I，HPLC检测含量为98.1％。

实施例3：

取乙酸乙酯、乙醇、水，按6∶4∶5比例混和，在分液漏斗中静置12小时，分取上下相。取上相注满高速逆流色谱柱，转动主机，转速800rpm，泵入下相做流动相，待有流动相流出时，调整流速为1ml/min，同时取流动相溶解色价400的栀子黄色素1g，由进样阀进样，SP-200紫外检测器检测，根据图谱收集目的成分，减压浓缩流分真空干燥，得棕红色粉末西红花苷-I、HPLC检测含量为98.8％。