[发明专利]提取海州香薷中抗肿瘤成份咖啡酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物的生物资源化利用领域，涉及修复植物——海州香薷中抗菌抗肿瘤活性成分咖啡酸的分离纯化方法。

背景技术

海州香薷(Elsholtzia splendens)，又称铜草，为唇形科香薷属植物，在我国长期被定为药材香薷的基原植物，但1995版药典对此进行了修改。民间对海州香需的应用较为广泛，功效似香薷。早在1953年，著名勘探地球化学家谢学锦院士和徐邦梁先生发现并报道了海州香薷是铜矿的指示植物，是我国寻找铜矿和铜矿开采的有效指示植物。近年来，我国学者对海州香薷忍耐和积累铜进行了大量的调查和研究。海州香薷被广泛用于废旧铜矿及铜污染土壤的生态恢复。创立和集成海州香薷对污染土壤植物修复及其产后资源化的技术体系，如何合理资源化利用修复植物海州香薷是一个亟待解决的瓶颈问题。

咖啡酸(Caffeic acid)又名水解咖啡鞣酸、3，4-二羟基肉桂酸、3-(3，4-二羟基苯基)-2-丙烯酸，为桂皮酸类化合物，分子式C₉H₈O₄，分子量180.15；为黄色结晶，分解点223～225℃(在194℃软化)。微溶于冷水，易溶于热水及冷乙醇。普遍存在于当归、川芎等常用植物药中，通常存在于菊科、蔷薇科、无患子科、毛茛科、水龙骨科、芸香科、蓼科、败酱科、唇形科以及杜仲科植物的花、叶或果实当中。具有抗菌、抗病毒、抗蛇毒、抗腹泻、抗生育及抗肿瘤等多种药理活性，还具有凉血止血功能。有文献报道咖啡酸可竞争性地抑制内皮素-1(Endothdin-1，ET-1)与受体的结合，常用于治疗高血压、冠心病、心律失常等疾病。作为羟基肉桂酸的代表化合物，咖啡酸具有很强的抗氧化活性。

咖啡酸具有多种药理活性，因而咖啡酸及其衍生物的制备已经得到越来越多的关注。采用传统化学合成方法制备咖啡酸，存在反应时间长、纯度不理想、产品中有害物质残留高，造成咖啡酸产品不理想等。卞建刚等人的专利“一种咖啡酸原料药的制备方法”(专利号：ZL 200910015552.9)中公开的方法：在反应釜中加入DMF和无水吡啶的混合溶剂，再加入3，4-二羟基苯甲醛和丙二酸，溶解制得反应溶液，加入催化剂三苯甲基钠和三甲基哌啶，开启搅拌升温至70-100℃反应生成咖啡酸，然后经干燥得咖啡酸产品。然而此方法须在高温高压无水条件下进行，反应条件苛刻、危险性高、原料复杂、成本高，且有害性原料仍有少量残余，难以保证药品安全。

海州香薷具有忍耐高铜环境的能力。修复高铜环境的海州香薷中咖啡酸含量高。咖啡酸是海州香薷植物的主要活性成分之一。海州香薷植物中的咖啡酸与其体内的铜离子代谢紧密关联。据报道，咖啡酸本身不与Cu(II)螯合，而是咖啡酸酚氧负离子(ArO^-)作为双齿配体与Cu(II)进行螯合，形成的酚氧负离子-Cu(II)络合物(ArO^--Cu)通过分子内电子转移生成咖啡酸邻醌结构和Cu(I)。海州香薷具有忍耐高铜的特性或许与其体内含有大量的咖啡酸有关，这不仅为深入研究海州香薷忍耐及积累铜的机理提供理论依据，而且为开发植物源咖啡酸提供技术基础。

目前国内尚无报道从植物中提取高得率(＞0.09％)高纯度(＞98％)咖啡酸的工艺技术专利，也没有报道关于从修复植物海州香薷中分离纯化活性成分咖啡酸的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种提取海州香薷中抗肿瘤成份咖啡酸的方法，采用本发明的方法能高得率的获取高纯度的咖啡酸。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种提取海州香薷中抗肿瘤成份咖啡酸的方法，依次包括以下步骤：

1)、粗提：将盛花期收获的海州香薷花枝和叶片风干后磨成干粉末，用体积浓度≥95％的乙醇浸泡至少2天，干粉末与乙醇的重量/体积为：1kg干粉末/8～15L乙醇；再超声波处理0.5～1.5h，过滤后得到提取液，提取液经真空浓缩，得稀浸膏；

2)、萃取：按照每kg稀浸膏配用5～8L超纯水的用量比，将上述稀浸膏用超纯水溶解，然后再用与超纯水相同体积的石油醚反复萃取，直至所得的石油醚层无色；得石油醚层和水层；

将上述水层用与超纯水相同体积的乙酸乙酯反复萃取，直至所得的萃取液(即乙酸乙酯萃取层)在254nm和365nm紫外下均无荧光；合并所得的乙酸乙酯萃取层然后进行减压浓缩，得棕黑色的乙酸乙酯层浸膏；

3)、大孔树脂粗分离：