[发明专利]一种海马抗菌肽hkplp的化学合成方法及其在养殖业中的应用

权利要求书

1.一种海马抗菌肽hkplp的化学合成方法及其在养殖业中的应用，主要包括以下步骤：

1)以氨基树脂为载体，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得hkplp-氨基树脂，期间依次脱除Fmoc保护基团；

2)用三氟乙酸混合溶液把肽从树脂上切下，处理干燥得粗品；

3)粗品过G10柱纯化，浓缩干燥获得成品；

4)测定人工合成的抗菌肽hkplp的抗菌谱；

5)测定人工合成的抗菌肽hkplp的最小抑菌浓度(MIC)；

6)将人工合成的抗菌肽hkplp添加到饲料中在养殖业中的应用。

2.根据权利要求1所述方法，其特征是：所述氨基树脂为Fmoc-氨基树脂。

3.根据权利要求1所述方法，其特征是：固相合成连接氨基酸过程中，Fmoc保护基团脱除剂用20％哌啶/DMF，Fmoc-AA按缩合量的2-5倍量加入，其中Fmoc-AA、缩合剂比例按摩尔比1∶1投放，缩合反应每次2-4小时。

4.根据权利要求1和3所述方法，其特征是：在氨基酸连接过程中，每一步氨基酸缩合均采用Kaise Test检测反应是否缩合完全，如显色反应呈阳性重复缩合该氨基酸。

5.根据权利要求1和3所述方法，其特征是：缩合剂体系采用DIC+A或A+B+C，其中A为HOBt或HOAt，B为HBTU、HATU、PyBOP或TBTU，C为DIPEA或TMP，可以采用排列组合的方式相互组合。

6.根据权利要求1中2)所述方法，其特征是：三氟乙酸混合溶液为TFA∶Tis∶Phenol按体积比95∶2.5∶2.5，反应时间为3-4小时。

7.根据权利要求1中2)所述方法，其特征是：处理干燥是指切割液浓缩或吹至干后用冰乙醚析出固体，离心干燥。

8.根据权利要求1中3)所述方法，其特征是：用1％的醋酸溶液处理hkplp粗品，离心取上清过G10柱。

9.根据权利要求1中3)所述方法，其特征是：收集的hkplp过柱液经浓缩后干燥。

10.根据权利要求1中4)所述内容，其特征是：用平板培养法表明人工合成的hkplp对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K₁₂D₃₁、大肠杆菌DH5α、沙门氏菌、动物致病大肠杆菌和医院临床病例分离的大肠埃希菌、尿肠球菌、溶血葡萄球菌均有良好的抗菌活性。

11.根据权利要求1中5)所述内容，其特征是：采用倍比稀释的方法配制不同浓度的hkplp溶液，加入到培养菌液中培养16h后测OD₆₃₀值，确定人工合成hkplp对不同菌株的最小抑菌浓度MIC。

12.根据权利要求1中6)所述内容，其特征是：养殖业中的应用是指对养殖动物的应用，包括兽牧、 水产及家禽等。

13.根据权利要求1中6)所述内容，其特征是：人工合成抗菌肽hkplp以200ppm、500ppm、1000ppm不同浓度加到饲料中在春秋两个季节对对虾生长的影响。

14.根据权利要求1中6)所述内容，其特征是：人工合成抗菌肽hkplp添加到饲料中与传统饲料做比较对鸡的影响。

15.根据权利要求1中6)所述内容，其特征是：人工合成抗菌肽hkplp的应用是指作为饲料添加剂添加到饲料中。