[发明专利]一种表达HSA-vMIP-Ⅱ融合蛋白的酵母表达体系及其构建方法

权利要求书

1.一种表达HSA--vMIP-Ⅱ融合蛋白的表达体系，由质粒pPICZaA-HSA-vMIP-Ⅱ转化至巴斯德毕赤酵母得到。

2.权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述质粒pPICZaA-HSA-vMIP-Ⅱ来源于含有质粒pPICZaA-HSA-vMIP-Ⅱ的大肠杆菌DH5a。

3.权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述巴斯德毕赤酵母菌株为酵母菌X33。

4.权利要求1所述的表达体系的构建方法，是从含有质粒pPICZaA-HSA- vMIP-Ⅱ的大肠杆菌中提取重组质粒，对重组质粒进行线性化，利用电转化方法转化巴斯德毕赤酵母菌感受态细胞，得到重组酵母，经抗性筛选后，PCR鉴定得到阳性克隆，利用阳性克隆子进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE分析，Western-Blot鉴定，获得表达体系。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述PCR是以重组酵母的基因组为模板，两种不同的引物分别扩增，第一组上游引物序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物序列如SEQ ID NO:2所示，第二组上游引物序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物序列如SEQ ID NO: 4所示。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述对重组质粒进行线性化使用的限制性内切酶为PmeⅠ。

7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述电转化的参数为电压1.5kV，电容25μF，电阻200Ω；电击时间为4～10秒，电击一次。

8.根据权利要求1所述表达系统的表达产物HSA- vMIP-Ⅱ融合蛋白。

9.根据权利要求6所述的HSA- vMIP-Ⅱ融合蛋白在制备抑制外周血单个核细胞药物中的应用。