[发明专利]一种从猪血中提取免疫球蛋白G的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种从哺乳动物血液中提取免疫球蛋白G的方法，特别涉及一种从猪血中提取免疫球蛋白G的方法。

背景技术：

免疫球蛋白普遍存在于哺乳动物和人类的血液、组织液和外分泌液中，并广泛用于生物医学领域。目前免疫球蛋白的分离方法有硫酸铵分级沉淀法，乙醇分离法，这些方法都用于免疫球蛋白的粗提，进一步纯化的方法主要包括离子交换法、凝聚过滤法、亲合色谱法和超滤法。有时，将几种方法结合使用。

现有的从动物血液中提取免疫球蛋白G的加工方法都停留在实验室的研究和运用上。中国轻工业联合会和北京市食品工业研究所联合出版的《食品工业科技》杂志2003年第6期“工艺技术”专栏发表的，由卜春文、贾建波撰写的文章《猪血中IgG的分离、纯化放大试验工艺研究》，其工艺过程采用了离心、盐析、分离沉淀、渗析、超滤、冷冻干燥六个重要工序。该工艺是可行的，并且充分考虑了废液的综合利用，但该工艺生产成本高，生产周期长，生产效率低，不能用于工业化连续生产。

发明目的：

本发明的目的是针对上述现状，提供一种从猪血中提取免疫球蛋白G的方法，该方法可有效提高产品质量，降低生产成本，缩短生产周期，提高了生产效率，适用于工业化生产。

如上构思，本发明的技术方案是：一种从猪血中提取免疫球蛋白G的方法，其特征在于：依照下列步骤完成：

①收集健康的猪血；

②将猪血进行抗凝处理；

③将步骤②经过抗凝处理的猪血进行低温保鲜、低温运输和制冷贮藏处理；

④将步骤③的产物进行辛酸沉淀，具体方法是：将血浆按比例加入乙酸盐缓冲液，混匀搅拌，用NaOH调整pH值，加入辛酸，静置反应后进行高速离心分离，得到含IgG的粗提液；

⑤将步骤④得到的含IgG的粗提液进行超滤浓缩，得到IgG浓缩液；

⑥将IgG浓缩液进行低温喷雾干燥，即制得免疫球蛋白G成品。

上述抗凝处理采用食品级柠檬酸钠，添加量为4.0-6.0g/kg猪血。

上述低温保鲜、低温运输和制冷贮藏的温度保持在8±2℃，制冷贮藏时搅拌机的转速为28-30rpm。

上述辛酸沉淀的条件为：血浆和乙酸盐缓冲液的比例为1∶5-1∶2、pH为4.0-4.7、温度20-30℃、时间：15-45min，按25-40μl/ml加入辛酸。

上述高速离心的转速为14000-16000rpm。

上述超滤浓缩是用中空纤维膜组件装置进行的。

上述浓缩液低温喷雾干燥的进口温度为155-165℃，出口温度为65-75℃。

本发明具有如下的优点和积极效果：

1、本发明采用了低温保鲜、低温运输和制冷贮藏，血液的温度保持在8±2℃，保证了血液不变质，不溶血，便于长途运输。

2、本发明采用的方法简便易行，特别是在大量提取过程中当使用常规的硫酸铵分级盐析法无法有效去除由于溶血过多而造成的产品外观不良而导致产品质量下降时，使用本提取方法可有效去除血浆中由于溶血而存在的血红素，显著改善产品外观。

3、本发明可有效降低生产成本，缩短生产周期，提供生产效率，有利于迅速开拓市场。

4、本发明采用了低温喷雾干燥，不同于常见的冷冻干燥，节约了成本，提高了生产效率，且最大限度地保护了IgG的活性。

具体实施方式：

一种从猪血中提取免疫球蛋白G的方法，依照下列步骤完成：

1、收集健康的猪血：健康的猪血是指加工的动物血液全部来自定点大型屠宰场，所有的猪必须经过国家动物检疫部门检验无疫病。

2、将猪血进行抗凝处理：采用的抗凝剂为食品级柠檬酸钠，添加量为4.0-6.0g/kg猪血。

3、将步骤②经过抗凝处理的猪血进行低温保鲜、低温运输和制冷贮藏处理；低温保鲜、低温运输和制冷贮藏的温度保持在8±2℃，制冷贮藏时搅拌机的转速为28-30rpm。

4、将步骤3的产物进行辛酸沉淀，具体方法是：将血浆按比例加入乙酸盐缓冲液，混匀搅拌，用NaOH调整pH值至4.0-4.7后按25-40μl/ml加入辛酸，在20-30℃之间静置15-45min后进行高速离心分离(高速离心的的转速为14000-16000rpm)，得到含IgG的粗提液；

5、将步骤4得到的含IgG的粗提液用中空纤维膜组件装置进行超滤浓缩，得到IgG浓缩液；

6、将IgG浓缩液进行低温喷雾干燥，即制得免疫球蛋白G成品。低温喷雾干燥的进口温度为155-165℃，出口温度为65-75℃。