[发明专利]一种具有生物活性的盖髓剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于一种新型的具有生物活性的牙体修复材料的制备方法，具体涉及包括人在内的各种动物牙体组织的处理后构建生物活性材料的方法。

技术背景

当前龋病已成为危害口腔乃至人体健康的一大疾患，WHO已将龋病列为危害人类健康的第三位疾病，其发病率逐年上升。其危害轻者引起冷热刺激不适，严重者引起自发疼，疼痛剧烈，严重影响患者的身心健康、心情和工作。病变进一步发展可引起牙髓病、根尖周病、和颌骨骨髓炎，严重影响患者的全身健康。此外，龋病任其发展其最终将导致牙齿的缺失，影响消化功能，使得全身营养供应不良，体质下降。

目前治疗浅龋和中龋可使用银汞充填、玻璃离子水门汀充填、树脂充填等进行治疗，深龋在正确判断牙髓状况的情况下应该尽可能的保存活髓。因为一旦将牙髓去除，牙体组织会因得不到良好的营养供应而变得很脆弱，不利于咀嚼功能的发挥。盖髓术是一种保护活髓的治疗方法，在接近牙髓的牙本质面或已暴露的牙髓创面上，覆盖具有使牙髓病变恢复效应的制剂，以保护牙髓，消除病变。目前，比较常用的盖髓剂有Ca(OH)₂、羟基磷灰石、玻璃离子水门汀、抗生素及糖皮质激素等。然而，现阶段国际公认的盖髓剂仍然为Ca(OH)₂，其主要是通过其碱性的特性，升高局部pH值，使得其覆盖的牙髓组织变性坏死，这对牙髓组织来说是种损伤作用，然而这能刺激其下的牙髓组织启动牙本质的修复过程，形成牙本质桥，最终形成修复性牙本质。但是，临床上牙髓术的长期成功率不是很高，有研究表明，Ca(OH)₂直接盖髓的5年成功率为45%，而10年成功率仅为20%（M. Goldberg, N. Six, C. Chaussain，et al, Dentin Extracellular Matrix Molecules Implanted into Exposed Pulps Generate Reparative Dentin: a Novel Strategy in Regenerative Dentistry, J Dent Res. 2009 May ; 88(5): 396–399）。使用盖髓剂失败的病例，需进一步做根管治疗，当盖髓剂为Ca(OH)₂时，由于Ca(OH)₂可能存在无限制性的诱导矿化，其患者的髓腔和根管腔存在严重钙化现象严重，使得根管治疗难以顺利完成，临床处理费时费力。

虽然Ca(OH)₂盖髓剂存在着上述不足，然而目前还没有找到可替代氢氧化钙的能形成修复性牙本质或具有生物活性的盖髓剂。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种新的具有生物活性的盖髓剂及其制备方法。

本发明提供的具有生物活性的盖髓剂，包括牙本质浸提液和牙本质粉末，所述牙本质浸提液是牙本质组织于培养基中培养所得上清液，所述牙本质粉末为经培养基培养后的牙本质研磨所得粉末。

上述具有生物活性的盖髓剂中，所述培养基可以为适宜培养牙本质组织的常用培养基，优选为α-MEM培养基。

本发明提供的具有生物活性的盖髓剂的一种制备方法，包括以下步骤：

（1）取健康牙体组织，用PBS液清洗，去除牙周膜、牙骨质及牙髓，灭菌；

（2）将步骤（1）所得牙体组织冰冻后研磨成颗粒状；

（3）将步骤（2）所得颗粒状牙体组织置于培养基中培养；

（4）取步骤（3）培养所得上清液过滤，过滤得到的滤液为牙本质浸提液（下文简称浸提液）；

取培养后的牙本质颗粒用PBS离心冲洗后烘干，研磨成粉末，为牙本质粉末。

上述具有生物活性盖髓剂的制备方法中，步骤（1）中所述去除牙周膜、牙骨质及牙髓的方法可以为：用20000转/分钟的牙科低速手机将牙冠及部分根尖截除，然后用30万转/分钟的牙科高速手机将牙周膜、牙骨质去除，拔除剩余牙体组织内的牙髓，扩锉针扩锉根管内壁去净牙髓。

上述具有生物活性盖髓剂的制备方法中，步骤（1）中所述灭菌的方法可以为：将去除牙周膜、牙骨质及牙髓的牙体组织置于去离子水中，浸泡30分钟-1小时，超声振荡30分钟；重复3-6次；取出牙体组织，于含50 U/ml 青霉素、50 mg/ml链霉素的双抗溶液中浸泡72小时。

上述具有生物活性盖髓剂的制备方法中，步骤（2）中所述牙体组织冰冻的方法可以为：将牙体组织放入4℃冰箱冰冻2-3小时，转入-20℃冰箱冰冻2-3小时，放入-80℃冰箱冰冻2-3小时，最后放入液氮中20-30分钟后取出。