[发明专利]表达马链球菌兽疫亚种类M蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗

权利要求书

1.一种用于预防和/或治疗马链球菌兽疫亚种引发疾病的疫苗组合物，其中含有重组猪痘病毒和一种或多种药物学上可接受的载体或佐剂，该重组猪痘病毒包含猪痘病毒载体和马链球菌兽疫亚种类M蛋白的编码基因。

2.权利要求1中所述的重组猪痘病毒，该重组猪痘病毒包含猪痘病毒载体和马链球菌兽疫亚种类M蛋白的编码基因。

3.权利要求1或2所述的疫苗组合物，其中所述的马链球菌兽疫亚种类M蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.权利要求1至4中任一项所述的疫苗组合物，其中所述的猪痘病毒载体为VR-363。

5.权利要求2所述的重组猪痘病毒在制备用于预防和/或治疗马链球菌兽疫亚种引发疾病的药物中的用途。

6.权利要求5所述的用途，其中所述的马链球菌兽疫亚种引发疾病为猪链球菌病。

7.一种制备重组猪痘病毒的方法，该方法包括：

(1)利用特异性引物对扩增马链球菌兽疫亚种类M蛋白的编码基因；

(2)把SzP基因克隆入穿梭载体pUSZ11/P28M中，然后通过PCR和酶切鉴定，获得含有SzP基因的穿梭载体pUSZ11/P28S；

(3)让含有SzP基因的穿梭载体pUSZ11/P28S与猪痘病毒同源重组，获得重组猪痘病毒rSPV-SzP。

(4)纯化重组猪痘病毒rSPV-SzP。

8.权利要求7所述的方法，其中所述的特异性引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示

9.权利要求7或8所述的方法，其中所述的让含有SzP基因的穿梭载体pUSZ11/P28S与猪痘病毒同源重组的具体操作为：用猪痘病毒(SPV)感染PK15单层细胞，2小时后用脂质体转染法加入穿梭载体pUSZ11/P28S，二者发生同源重组。PK15细胞在常规条件下培养4天后，反复冻融3次，获得最初的重组猪窦病毒rSPV-SzP。

10.权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述的纯化重组猪痘病毒rSPV-SzP的具体操作为：将所述重组猪痘病毒rSPV-SzP经倍比稀释，接种PK15单层细胞，使其在3-4天内形成独立的蓝色噬斑，挑取单独的病毒噬斑，适当稀释后再次接种PK15单层细胞，重复6次，直至最后得到的重组猪痘病毒能够稳定遗传。