[发明专利]一种病毒类疫苗的纯化方法

说明书

技术领域

本发明为一种源自哺乳动物体细胞的病毒类疫苗的纯化方法，将源自上游的病毒收获液进行浓缩、溶解和分离等处理，获得形态较为统一的含抗原成分的溶解液，再对溶解的病毒抗原进行层析纯化处理，工艺中还包括灭活处理。这种纯化工艺可以获得较高的抗原回收率的同时，也可以获得较高的抗原纯度以降低疫苗对人体的副作用。 

背景技术

很多病毒可以引起人类疾病并具有传染性，如肺炎、肝炎、流行性感冒、手足口病等。预防这些传染性疾病的有效、经济的手段之一是进行疫苗预防接种。病毒性疫苗通过严格的制备工艺，如病毒培养和抗原纯化等步骤生产出来。制备工艺的产能水平、效率和质量保证等往往决定着疫苗产品带来的经济和社会效益。流行性感冒可引起多种呼吸道疾病，全球范围内每年约有300-500万人口患流感类疾病，因流感致死的人数也在25万-50万人。在我国，流感及其并发症所造成的死亡率仅次于心脏病、肿瘤和心血管病。预防流感的最有效、最经济的手段是进行流感疫苗的预防接种。传统的流感疫苗是通过鸡胚培育流感病毒，再经过纯化灭活和装配等工序生产的。成套的鸡胚系流感疫苗工艺在近60年里一直是世界范围内成熟且唯一的流感疫苗的生产方法。因为工艺技术本身并不复杂也一直未有大的改进，生产的流感疫苗在世界各地得到了广泛的使用，其有效性和安全性也获得了广泛的认可，多年的统计数据证实了季节性流感疫苗的接种有效的预防和降低了人群中流感及并发症的发病率。 

然而，在2004年爆发H5N1禽流感和2009年爆发H1N1甲型流感的背景下，流感疫苗供不应求，世界性的产能不足以及生产时间过长突显了传统生产工艺已经不能满足新的全球市场变化和新的生物制品安全要求。突出的矛盾集中表现在以下几个方面： 

1.季节性流感疫苗的需求不断增加； 

全球流感疫苗市场规模巨大，并且呈每年递增的趋势。为了降低世界范围内的流感疫病致死率，从80年代开始，很多国家都增加了流感疫苗的接种率，尤其是针对高危人群(婴幼儿和老年人)的保护力度；然而流感疫苗的产量并没有同速提升。 

2.疫苗供应链脆弱； 

虽然流感疫苗的需求量不断增加，市场不断扩大，欧美大型的疫苗生产商却遇到了产能瓶颈。由鸡胚生产的流感疫苗受到了越来越严格的行业监管(如cGMP的规定)的限制，突出体现在从养鸡场的监管到合格鸡蛋的筛选的各个环节中。到了90年代末，美国市场上两家大型流感疫苗厂商相继退出了市场；到2002年仅剩下3家，在2004-2005年度，美国PowderJec公司因为产品质量问题，其生产超过3千万剂的季节性流感疫苗被迫停止销售，但是由于制作流感疫苗所需的鸡蛋无法得到及时补充，市场上的流感疫苗数量骤减。同年，席卷全球的禽流感疫情使得流感疫苗需求量大增，直接导致了市场供不应求的局面。这次教训促使美国政府乃至全球加大研发力度，寻求较传统工艺更可靠的新生产技术。 

3.大流行流感疫情的突袭： 

随着禽流感疫情在亚洲和其他地区的不断出现，人患高致病性禽流感风险的增加，世卫组织的多数专家认为禽流感病毒从畜传染人到人传染人的转变只是时间问题。由于禽流感病毒对家禽的致死率极高，传统鸡胚生产的流感疫苗所需的鸡蛋供应源受到威胁，因此在大流行流感爆发时的疫苗供应受到很大挑战。此外，根据美国BARDA的数据显示，用传统工艺生产出H1N1首支甲流疫苗的平均时间为21-24周，疫苗大规模供应市场的时间明显晚于甲流疫情的爆发高峰，并不能有效的控制疫情。2009年中国疫苗企业创造了生产首支甲流疫苗87天的全球最快速度，然而由于产能不足等原因，大规模的接种迟到一个多月才得以展开。 

传统工艺在面对大流行流感疫情时突出的产能和产速问题，促使流感疫苗企业在面对大流行流感前不能再依靠一种生产技术，相对更可靠、更灵活、更快速的新工艺技术成了近几年世卫组织和欧美等国家支持的重点。 

这种新工艺技术的突出代表之一是基于哺乳动物细胞培养技术和纯化技术开发的第二代流感疫苗制备工艺，较传统鸡胚工艺的优势主要体现在四个方面：灵活性，可靠性，时效性和可持续发展。 

灵活性 

由于生产流感病毒的哺乳动物细胞在密封的生物反应器中进行培养，疫苗剂量可以通过增加或减少生物反应器的数量或者容积来实现，可操作性强；细胞种可以长期保存在体积小的容器中，用存方便，保证细胞的培养可以随时进行；生产操作全部在厂房中进行，受到外界的影响小。 

可靠性