[发明专利]一种病毒类疫苗的纯化方法

权利要求书

1.一种源自哺乳动物体细胞培养的病毒性疫苗的纯化方法，所述方法包括如下步骤：将源自上游的病毒收获液进行浓缩和溶解处理使病毒收获液的成分呈现溶解部分和非溶解部分，再将两部分分离并保留病毒收获液中的溶解部分，然后对其中的溶解剂进行吸附去除处理，获得形态较为统一的抗原溶解液，用层析法纯化溶解液中的抗原成分以获取较高抗原纯度和其回收率的抗原收获液，然后对抗原收获液进行灭活处理。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓缩通过低速离心和超滤法和/或澄清过滤进行。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶解处理通过加入至少一种溶解剂进行。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述溶解处理通过加入选自如下的溶解剂进行：阳离子溶解剂、无离子溶解剂和双离子溶解剂。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将两部分分离的方法通过高速离心进行，吸取上清液，即为病毒收获液中的溶解部分。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶解部分含有病毒抗原和少量的杂质，非溶解部分含有大量杂质和极少的病毒抗原或者不含有病毒抗原。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吸附去除处理通过加入和过滤吸附剂。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述层析法通过选自如下的纯化方法进行：离子交换层析法、亲疏水性层析法、亲合层析法、液相-液相层析法和分子筛层析法。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述灭活处理通过加入甲醛或者β-丙内酯进行。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述较高抗原纯度和其回收率通过鉴别和优化纯化步骤中对抗原纯度和回收率有重要影响的参数进行。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述有重要影响的参数包括浓缩步骤里的截流分子量、浓缩倍数和滤膜表面积；溶解步骤里的溶解剂浓度、溶解时间、溶解时温度和病毒收获液浓缩倍数；层析步骤里的缓冲剂盐浓度、洗脱液盐浓度、pH值和上柱抗原量。

12.如权利要求10和11所述的方法，其中所述鉴别和优化的方法还包括对多个参数和抗原纯度和抗原回收率通过软件进行建模，依据试验数据模拟评估参数在单一或者多重互作下对抗原纯度和回收率的影响。

13.如权利要求10-12中任一项所述的方法，所述的方法还包括构建趋势图来量化多个参数在单一或者多重互作下对抗原纯度和回收率的影响。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞选自MDCK狗肾细胞和Vero猴肾细胞。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述病毒性疫苗来自RNA病毒。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述RNA病毒是源自季节性、大流行前或大流行的流感病毒。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述病毒抗原来自流感病毒，即血凝素蛋白和/或神经氨酸苷酶和/或离子通道M2蛋白。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述抗原回收率是血凝素回收率：抗原纯度包括全蛋白含量、DNA含量、牛血清白蛋白对血凝素的比率。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，所述方法还包括将盐或盐溶液加入所述病毒收获液中。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，所述方法还包括对病毒收获液或溶解液的灭活处理。