[发明专利]一种抗哮喘的小分子药物

说明书

技术领域

本发明发现一种能够抑制T细胞分泌白介素-4(IL-4)的高活性抗哮喘的小分子药物，涉及开发自身免疫性疾病相关的化学药物和抗哮喘药物的应用。 

背景技术

中国的新药研发具有广阔的前景。其中，系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、哮喘、肠炎、动脉粥样硬化等炎症疾病、癌症以及神经退行性疾病帕金森氏综合征等免疫性疾病严重威胁着我国居民的健康。疾病的发生是人体免疫系统的调节失衡。免疫系统主要通过分泌一些细胞因子(如IL-4，IL-6，IL-10，IL-12，TGF-β，NF-κB，TNF-α等)来调节和激发各种免疫过程。初始CD4+T细胞在不同的细胞因子诱导下，分化成功能及表型不同的效应性辅助性T细胞(Th)和调节性T细胞(Treg)，其分化过程受细胞因子的调节。在ConA、IL-2、IL-4的刺激下Th2细胞都可产生IL-4，IL-4与其受体IL-4R结合后，可诱导不同的生物学效应，募集下游的信号转导、激活效应因子，激活B细胞和嗜酸性粒细胞的增殖和分化。过量IL-4的产生可介导并加速多种疾病，因此降低IL-4含量或抑制NF-κB活性理论上是一些炎症、感染、免疫或恶性疾病的有效治疗手段，例如哮喘、牛皮癣、炎症性肠病等等。因此，我们基于IL-4的调节机制，人为的干预各种免疫细胞因子的激活与分泌，上调或下调达到适当的比例，从而调控一些免疫失衡，达到治愈疾病的目的。我们建立了IL-4-GFP转基因报告小鼠高通量筛选模型，筛选能抑制IL-4分泌的高活性小分子药物。 

发明内容

本发明公开了能够抑制T细胞分泌白介素-4高活性小分子药物SZ2#，涉及哮喘、牛皮癣等自身免疫性疾病相关的化学药物和抗炎药物的应用。SZ2#其化学结构式和物理常数见表1： 

表1 

本发明通过IL-4-GFP转基因报告小鼠高通量筛选模型，采用IL-4-GFP转基因报告小鼠全脾脏细胞，在ConA、IL-2、IL-4因子的刺激下，与梯度稀释的不同浓度的SZ2#共培养48小时，后收细胞，用anti-CD4-APC对培养的细胞分别进行染色，最后进行流式分析SZ2#对IL-4-GFP⁺量的影响。本发明在细胞水平证明了SZ2#对IL-4的产生具有显著的抑制效果，化合物SZ2#结构稳定，毒性较低，并且有很好的抗炎、抗哮喘作用。 

具体实施方式

实施例一：一种抑制白介素-4分泌的高活性抗哮喘药物SZ#2的活性与毒性评价 

1.活性筛选 

1.1将SZ2#在含10％胎牛血清的改良型RPMI-1640培养液中依次梯度稀释，各取100μl加入96孔板中，设置0.02％DMSO为对照组。取转IL-4-GFP基因报告小鼠脾脏，在超净台中研磨得到淋巴细胞悬液，用含10％胎牛血清的改良型RPMI-1640培养液制成密度为4×10⁶个细胞/ml的细胞悬液，加入ConA、IL-2、IL-4因子刺激细胞增殖分化，将细胞平行加入已加入不同浓度小分子药物的96孔板中，每孔100μl细胞悬液，培养48小时。 

1.2  48小时后，收培养培养的细胞于流式管中，洗一遍(加入PBS，4℃、1400转/分、离心7分钟)，弃上清后用anti-CD4APC抗体冰浴染色15分钟，然后再用PBS洗一遍，最后进行流式细胞仪检测。 

1.3流式检测数据见图1。 

1.4剂量-效应结果见图2。 

2.毒性测试(MTT) 

2.1先将SZ2#在含10％胎牛血清的改良型RPMI-1640培养液中依次梯度稀释，各取100μl加入96孔板中，设置0.02％DMSO和水为对照组。取野生型BALB/c小鼠脾脏，在超净台下磨碎脾脏得到脾脏细胞，用含10％胎牛血清的改良型RPMI-1640培养液配制成密度为4×10⁶个细胞/毫升的细胞悬液，加入ConA、IL-2、IL-4因子刺激细胞增殖分化，将细胞悬液加入已加入不同浓度小分子药物的96孔板中，每孔100μl。 

2.2培养48小时后，每孔吸弃上清120μl，加入MTT溶液每孔20μl，再培养4小时。取出后4℃、1400r/min，离心7min，吸出所有上清，并每孔加入100μl DMSO，置摇床上振荡(200r/min)30分钟，紫色结晶全部溶解。在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值。 

2.3 SZ2#的剂量——毒性结果见图3。 

附图说明