[发明专利]葡糖淀粉酶变体

权利要求书

1.一种亲本葡糖淀粉酶的变体，所述变体在位置315包含变化，其中

(a)所述变化是

(i)在占据所述位置的氨基酸的下游插入氨基酸，

(ii)将占据所述位置的氨基酸缺失，或

(iii)用不同的氨基酸取代占据所述位置的氨基酸，

(b)所述变体具有葡糖淀粉酶活性并且

(c)所述位置对应于亲本葡糖淀粉酶的氨基酸序列的位置，所述亲本葡糖淀粉酶具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和/或对应于同源葡糖淀粉酶中的位置，所述同源葡糖淀粉酶与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列显示至少50％同源性。

2.权利要求1的变体，所述变体包含在位置315的以下取代中的一个或多个：F、Y、A、D、H、K、L、N、Q、R、S或T。

3.权利要求1或2中任一项的变体，所述变体包含以下取代中的一个或多个：G315F、G315Y、G315A、G315D、G315H、G315K、G315L、G315N、G315Q、G315R、G315S、G315T，其中所述位置对应于亲本葡糖淀粉酶的氨基酸序列的位置，所述亲本葡糖淀粉酶具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和/或对应于同源葡糖淀粉酶中的位置，所述同源葡糖淀粉酶与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列显示至少50％同源性。

4.权利要求1至3中任一项的变体，所述变体包含以下取代组合中的一个或多个：314F+315N、314W+315N、314Y+315N、314L+315A、314N+315R、314R+315D、315R+463T、315R+556E、315L+529N，其中所述各位置对应于亲本葡糖淀粉酶的氨基酸序列的位置，所述亲本葡糖淀粉酶具有SEQ IDNO：1的氨基酸序列，和/或对应于同源葡糖淀粉酶中的位置，所述同源葡糖淀粉酶与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列显示至少50％同源性。

5.权利要求1至4中任一项的变体，所述变体包含以下取代组合中的一个或多个：Q314F+G315N、Q314W+G315N、Q314Y+G315N、Q314L+G315A、Q314N+G315R、Q314R+G315D、G315R+A463T、G315L+D529N，其中所述各位置对应于亲本葡糖淀粉酶的氨基酸序列的位置，所述亲本葡糖淀粉酶具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和/或对应于同源葡糖淀粉酶中的位置，所述同源葡糖淀粉酶与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列显示至少50％同源性。

6.权利要求1至5中任一项的变体，其中所述亲本葡糖淀粉酶具有的氨基酸序列与SEQ ID NO：1的氨基酸序列有至少60％，优选至少60％，更优选至少大约70％，还更优选至少80％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且最优选至少98％同一性程度。

7.权利要求1至6中任一项的变体，其中所述亲本葡糖淀粉酶获得自踝节菌属，尤其是埃默森踝节菌(Talaromyces emersonii)。

8.权利要求1至7中任一项的变体，其中所述变体与亲本葡糖淀粉酶相比具有减少的缩合。

9.DNA构建体，其包含编码根据权利要求1至8中任一项的葡糖淀粉酶变体的DNA序列。

10.用根据权利要求9的DNA构建体转化的细胞。

11.根据权利要求10的细胞，所述细胞是微生物，具体而言是细菌或真菌。

12.用于将淀粉转化或部分水解成为含有葡萄糖的糖浆的方法，所述方法包括在根据权利要求1至8中任一项的葡糖淀粉酶变体存在下将淀粉水解物糖化。

13.根据权利要求1至8中任一项的葡糖淀粉酶变体在用于产生寡糖、麦芽糊精或葡萄糖糖浆的方法中的用途。

14.根据权利要求1至8中任一项的葡糖淀粉酶变体在用于产生高果糖玉米糖浆的方法中的用途。

15.根据权利要求1至8中任一项的葡糖淀粉酶变体在用于产生酒精饮料、燃料或饮用乙醇的方法中的用途。