[发明专利]一种4-1BBL蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种4-1BBL蛋白的制备方法，所述方法包括：

(1)取含4-1BBL蛋白的小鼠淋巴细胞，conA体外刺激培养后经trizol裂解，抽提得到mRNA；

(2)将mRNA逆转录得到4-1BBL胞外段蛋白的cDNA；

(3)对步骤(2)所得cDNA进行PCR扩增，得到4-1BBL蛋白目的基因；PCR扩增引物为：上游引物：5’-CTC GAG AAA AGA AGAACC GAG CCAAGA CCT-3’，下游引物：5’-GAA TTC TTC CCATGG ATT ATC AGG-3’；

(4)将步骤(3)PCR产物用Xho I和EcoR I双酶切后定向插入经同样双酶切的ppic9，获得重组质粒ppic9-4-1BBL；

(5)将重组质粒ppic9-4-1BBL转化至大肠杆菌DH5α，经培养扩增、抽提纯化、测序分析，获得测序正确的重组质粒；

(6)将测序正确的重组质粒转化至甲醇酵母菌，诱导表达重组蛋白；

(7)将表达重组蛋白的活化菌株进行诱导发酵培养，发酵液离心，取上清液分离纯化，得到纯化的4-1BBL重组蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(5)重组质粒ppic9-4-1BBL序列如下：CTC GAG AAA AGA AGA ACC GAG CCA AGA CCT GCATTG ACC ATT ACT ACT TCT CCA AAC TTG GGT ACA AGA GAAAAC AAC GCT GAC CAG GTC ACT CCA GTT TCT CAC ATC GGATGT CCA AAC ACC ACC CAG CAG GGA TCT CCT GTT TTT GCTAAG TTG TTG GCC AAA AAC CAG GCT TCT TTG TGT AAC ACTACC TTG AAC TGG CAC TCT CAA GAC GGT GCC GGT TCT TCTTAC TTG TCT CAG GGT TTG AGA TAC GAG GAG GAC AAG AAGGAG TTG GTC GTC GAC TCT CCT GGA TTG TAC TAC GTC TTTTTG GAG TTG AAG TTG TCT CCA ACA TTC ACC AAC ACT GGACAC AAG GTT CAG GGA TGG GTT TCT TTG GTT TTG CAG GCTAAG CCA CAG GTT GAC GAT TTC GAC AAT TTG GCC TTG ACTGTC GAA TTG TTC CCT TGC TCT ATG GAA AAC AAA TTG GTCGAC AGA TCT TGG TCT CAA TTG TTG TTG TTG AAG GCC GGACAC AGA TTG TCT GTC GGA TTG AGA GCA TAC TTG CAT GGTGCA CAA GAC GCT TAC AGA GAC TGG GAG TTG TCT TAC CCTAAC ACC ACT TCT TTC GGT TTG TTC TTG GTT AAA CCT GAT AATCCATGG GAA GAA TTC。