[发明专利]基于微流控芯片快速检测分析阿米巴抗体的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域，涉及一种基于微流控芯片快速检测分析阿米巴抗体的方法及其应用，具体涉及一种基于微流控芯片专门用于高通量快速阿米巴病血清学诊断方法及其应用。

背景技术

溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica，E.h)是引起阿米巴性结肠炎和肠外脓肿的病原体，具有侵入宿主组织或器官、适应宿主免疫反应和表达致病因子的能力。据统计，全世界约有五千多万人感染溶组织内阿米巴，每年有10万患者死于阿米巴病(amoebiasis)，为仅次于疟疾的第二种致死性原虫病。我国的平均感染率为0.949%，感染人数估计为1069万（1992年数据）。

当前临床诊断阿米巴感染的传统方法是从粪便中检出溶组织内阿米巴滋养体或包囊，但此方法的检出率不高，实践显示，对于阿米巴肝脓肿病例也不易从脓液中检出滋养体；而血清学检验对于诊断侵袭性阿米巴病具有其高敏感性和无创伤性的特点，且大多数无症状包囊携带者和阿米巴结肠炎患者血清中存在抗溶组织内阿米巴抗体，因此，血清学诊断是重要的阿米巴病实验室诊断方法之一。目前血清学诊断主要采用酶联免疫分析；酶联免疫分析（ELISA）的原理是把抗原或抗体的固相化，同时也将抗原或抗体用酶标记，结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应；用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开，再加入酶标记的抗原或抗体，通过反应而结合在固相载体上，此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度；但是ELISA常规免疫分析通常需要数小时甚至一天以上，操作过程复杂，需消耗大量昂贵的免疫试剂，且检测设备较大，并经常伴随着非特异性吸附等诸多缺点，难以满足现场检验要求。

20世纪90年代发展起来的微流体学科是指操作微小网络通道（5-500微米）中流体的科学技术，是分子生物学技术、微加工技术、机械制造技术、计算机技术等多种现代技术的发展与融合，是基于大规模平行处理生物信息分子原理的微型装置，具有信息通量大、自动化、系统化的特点；其中微流体芯片用于操作、传输微升（10^-6L）至毫微微升（10^-15L）量级的流体，可将生化反应的若干步骤包括分析、洗涤、检测等集成在一块或几块微流体芯片上，其微通道孔径只有微米级大小，具有浓缩和富集的作用，可加速反应缩短测试时间，从而大大降低了测试成本。与常规的实验技术相比，上述技术极大降低了试剂的消耗量（至少3个数量级）、同时分析产生的废液极少；在微小范围内的能量传递、物质分散更快更均匀，热能传导快，也更易实现各种操控，因此反应快、收率高，污染少、成本低。

目前，微流控芯片已从分离检测发展为包括复杂试样前处理的高功能全分析系统，从分析工具发展到包括在线检测的微型化学反应与合成手段。在微流控芯片上进行免疫分析，将微流控芯片的分析能力和抗原-抗体反应的特异性相结合，能有效的克服常规免疫分析的缺点，使得反应效率提高，操作步骤简化，检验时间缩短，样品、试剂和能量消耗大大降低。微流控芯片多种功能结合与集成化的特点使微流控芯片上的免疫分析与常规免疫分析相比有很多潜在的优势，因此受到越来越多的关注。但目前还未见有关基于微流控芯片快速检测分析阿米巴抗体的方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷和不足，提供一种基于微流控芯片快速检测分析阿米巴抗体的方法及其应用，尤其涉及一种基于微流控芯片专门用于高通量快速阿米巴病血清学诊断方法及其应用。

具体而言，本发明以微流控芯片为基础，建立一种基于微流控芯片快速检测分析阿米巴抗体的方法，其包括如下步骤：

（1）将抗溶组织内阿米巴抗体泵入微流控芯片的分析室；

所述的微流控芯片的分析室为整体柱或聚合填料灌柱，其中，聚合填料为硅胶填料或其它有机聚合物，本发明优选有机聚合微球；

（2）泵入数个填料体积的溶组织内阿米巴蛋白溶液，通过特异性结合，使溶组织内阿米巴抗原与聚合微球填料结合；

（3）将含有5%牛白蛋白的磷酸盐缓冲液泵入微流控芯片分析室，对结合重组溶组织内阿米巴抗原的聚合微球进行封闭；