[发明专利]一种植物根系相关功能基因研究模型的构建方法无效
| 申请号： | 201110039743.6 | 申请日： | 2011-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN102181473A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 向太和;孟莎莎;曹庆丰;杜苏瑞 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H5/06 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 植物 根系 相关 功能 基因 研究 模型 构建 方法 | ||
1.一种植物根系相关功能基因研究模型的构建方法，所述方法包括：
(1)将植物根系相关功能基因连接到转基因表达载体pRI101-AN上，得到含有目标基因的重组质粒；
(2)将含有目标基因的重组质粒转入到发根农杆菌K599中，以所得带有重组质粒的发根农杆菌K599侵染黄瓜萌发4天的活体苗的子叶下方0.2～0.5cm处，诱导形成转基因毛状不定根，待毛状不定根生长至长度为5～10cm时，在形成毛状根的部位以下剪掉主根，将形成的毛状不定根埋入土壤，继续生长1～2个月，即得所述植物根系相关功能基因的研究模型。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下：
(A)将含植物根系相关功能基因质粒与转基因表达载体pRI101-AN进行酶切后，用T4DNA连接酶连接，转化DH5α感受态细胞，在LB+Km 50mg/L固体培养基上筛选阳性克隆，挑取获得的单克隆，在LB+Km 50mg/L液体培养基上繁殖，提取质粒利用酶切进行鉴定，获得含有目标基因的重组质粒；
(B)利用冻融法将含有目标基因的重组质粒转入发根农杆菌K599菌株，含重组质粒的发根农杆菌K599菌液在LB+Str 50mg/L+Km50mg/L固体培养基上划线，于28℃培养2天后转入LB+Str50mg/L+Km 50mg/L液体培养基，28℃、200r/min振荡培养至菌液OD600为0.5，离心取菌体，以MS+As 25mg/L液体培养基悬浮清洗2次，然后以MS+As 25mg/L液体培养基重悬，制成菌悬液；
(C)用带针的无菌注射器吸取菌悬液，用针尖刺穿生长4天的黄瓜幼苗的子叶节点下方0.2～0.5cm处，滴加10～20μL菌悬液到伤口中，将黄瓜幼苗于人工气候室中进行培养诱导形成转基因毛状不定根，保持湿度75％以上、温度20～25℃、12h/12h光照和黑暗交替、光强1200～2400Lux；待毛状不定根生长至长度为5～10cm时，在形成毛状根的部位以下剪掉主根，将形成的毛状不定根埋入土壤，继续生长1～2个月，即得所述植物根系相关功能基因的研究模型。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于杭州师范大学，未经杭州师范大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110039743.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
