[发明专利]由桑叶中提取分离高纯度1-脱氧野尻霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药有效成分提取及分离的技术，特指一种由桑叶中提取分离高纯度1-脱氧野尻霉素的方法。

背景技术

桑叶为桑科(Moraceae)桑属植物(Morus L.)的叶，是国家卫生部公布的药食两用植物，全国大部分地区均有栽培生产，以南方蚕桑主产区产量最多，如江苏、广西、浙江、安徽、四川等。我国桑属植物有15个种4个变种，其中入药者多为白桑(Morus alba)。桑叶在我国资源丰富，又是古代医方中的一种常用中药。桑在《诗经》中已有记载，桑叶入药首见于《神农本草经》。桑叶味苦、甘，性寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、平肝明目、凉血止血之功效。历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症。现代医学在研究桑叶化学成分和动物实验基础上，发现桑叶具有降血压、降血糖、降低胆固醇、抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、抗毛细管渗透及利尿等功能。

1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）是一种哌啶类多羟基生物碱，英文名称为1-Deoxynojirimycin，简称1-DNJ，化学名称为3，4，5-三羟基-2-羟甲基四氢吡啶，分子式为C₆H₁₃NO₄ ，分子量为163，具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤转移等多种生物活性。截至目前的研究结果，自然界中以桑叶中含量最高。1-DNJ作为一种糖苷酶抑制剂，可以防止血糖浓度升高，具有降血糖、抗病毒和抗肿瘤转移等作用，具有良好的开发前景和应用价值，因而由桑叶中提取1-DNJ已成为国内外学者研究的焦点。

现有专利中，如专利号为 CN1579445A的发明专利是通过加入絮凝剂再醇沉得到桑叶提取物，1-DNJ含量1.0-3.0%；如专利号为CN1175818C的发明专利是通过絮凝、柱色谱分离精制，得到较高含量的桑叶浸膏，其中1-DNJ含量大于浸膏总重的50%。CN1430964A则是采用絮凝、离子柱色谱分离工艺；CN101654428A不使用絮凝剂，提取液酸化，浓缩除杂，再经阴、阳离子柱层析，凝胶柱层析等步骤得纯化产物；CN101020655A也是不使用絮凝剂，桑叶提取液加无机酸酸化处理，冷却除杂，再柱层析，得到提取物，1-DNJ含量大于10%。中国专利CN101020655A提供了一种从桑叶中提取1一脱氧野尻霉素(DNJ)的方法,是通过在桑叶的提取液中加入无机酸酸化处理,经冷却除去杂质,再经过柱层析获得1-DNJ含量不低于10%的桑叶提取物。该发明方法由于不需要加入絮凝剂,在降低成本、提高含量的同时保证了后处理过程中没有外源性的物质带入,再将酸化液浓缩后直接采用国产离子交换柱层析进行分离,大大降低了成本；该专利最大缺陷在于制得的1-脱氧野尻霉素含量较低，仅为10%左右。

而有关于由桑叶中提取分离高纯度1-DNJ的整套工艺还未见报道。

发明内容

为了解决上述现有技术的不足和缺点，本发明提供了一种由桑叶中提取分离高纯度1-脱氧野尻霉素的方法。

本发明的技术方案是：一种由桑叶中提取分离高纯度1-脱氧野尻霉素的方法，包括以下顺序步骤：

（1）取桑叶药材粉碎，过筛，得提取用桑叶粉末；

（2）原料粉末用含水溶剂提取，滤掉药渣，物料离心，得提取液；

（3）提取液浓缩至无乙醇，超滤膜过滤；

（4）料液用无机酸调pH至3.0-4.0，沉淀，离心除杂；

（5）酸化料液上强酸性阳离子树脂柱，水洗，再进行氨水洗脱，收集pH9-12洗脱液，用盐酸调至pH值中性；

（6）料液上大孔树脂柱，水洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集目标洗脱液；

（7）目标洗脱液减压浓缩、干燥，得粗品；

（8）粗品用无水乙醇溶解，过碱性吸附柱除杂，收集流出液；

（9）流出液减压浓缩，进行常温结晶和重结晶，得到质量含量高于98%的1-DNJ精制品。

优选地，步骤（1）中桑叶药材粉碎后过40目筛。

优选地，步骤（2）中的含水溶剂由水与乙醇混配而成；步骤（4）中无机酸为盐酸，其质量浓度为10%。

优选地，步骤（3）中超滤膜为中空醋酸纤维素膜。

优选地，步骤（5）中阳离子树脂选自型号002SC、D001、001×4、001×7或001×8，水和氨水洗脱体积均为3倍柱体积，氨水浓度为0.5-1.0%，流速为0.5-1倍柱体积/h。

优选地，步骤（6）中大孔树脂选自型号D101、HP20、AB-8、CAD-40、DM301或HPD-400，水和乙醇洗脱体积均为2倍柱体积，流速为0.5-1倍柱体积/h。