[发明专利]一种测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药成分含量的测定方法，特别是涉及一种应用高效液相色谱法同时测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法。

甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、胀果甘草（Glycyrrhiza inflate Bat.）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根茎。收载于中国药典2010年版（一部），味甘，平；归心、肺、脾、胃经。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功效。主要产于内蒙古、甘肃、新疆、陕西、东北、山西等地区。主要有效成分为皂苷类和黄酮类化合物。甘草黄酮类的代表成分主要有甘草苷、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素等；皂苷类的主要代表成分为甘草酸。现代研究表明，甘草酸可用于皮质激素的替代治疗并能防治肝炎，对慢性肝炎的肝细胞亦有良好的保护作用；甘草苷、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷等为代表的甘草总黄酮类，具有抗心肌缺血以及抑制艾滋病病毒增殖的作用；异甘草苷具有抗溃疡作用；甘草素、异甘草素具有显著的抗溃疡和解痉作用；异甘草素还具有雌性激素样作用, 可以抑制乳腺癌细胞的增殖。2010版药典仅同时测定了甘草酸、甘草苷两种成分的含量，采用HPLC法固定波长进行了含量测定。评价指标较少，对药材质量的评价不够全面；且使用同一波长检测，系统检测灵敏度有一定局限性。因此，需要建立一种选取每种待测指标最大吸收波长，同时测定多指标的含量测定方法。采用本方法---波长切换高效液相色谱法建立了同时测定甘草药材中7种成分含量的分析方法,以更好地控制甘草质量。该方法利用C₁₈色谱柱，选取合适的流动相系统，利用波长切换技术，用梯度洗脱的方式使7种成分达到了很好的分离。经过线性关系、精密度、准确度、稳定性、重复性、加样回收率等方法学考察，结果表明，该方法简便、快速、准确、重复性好，为更好地控制甘草药材及其炮制品的质量提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种全面、准确、简便的甘草成分含量测定方法。该测定方法选择了甘草及其炮制品中7种成分作为含量测定指标，评价信息更加全面。利用HPLC法进行梯度洗脱，特别加入了波长切换技术，该技术选用每种待测指标的最大吸收波长进行检测，保证仪器在测定每种物质时的检测灵敏度达到最大，使得测定结果更加准确、简便、快速。

采用的技术方案是：

一种测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法，其特征在于采用波长切换和梯度洗脱同时测定7种成分含量,包括下述工艺步骤：

1、供试品溶液的制备  取不同来源及不同炮制品甘草药材粉末，过60目筛，约0.3～1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入一定浓度的乙醇50～100ml，密塞，称定重量，超声处理20～50min，放冷，再称定重量，用相同浓度的乙醇补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

2、混合对照品溶液的配制  精密称取芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素对照品适量，分别加甲醇溶解，制成浓度分别为0.3～2.0mg·mL^-1的对照品储备液，备用。分别精密量取一定体积上述对照品储备液溶液，加甲醇稀释，制成每1ml含芹糖甘草苷20～30μg、甘草苷30～50μg、芹糖异甘草苷20～30μg、异甘草苷1～10μg、甘草素1～10μg、甘草酸100～200μg、异甘草素1～10μg的混合溶液，即得。