[发明专利]党参内酯分子印迹固相萃取柱的制备及应用

说明书

技术领域：

本发明专利涉及的是高分子合成及其在中药活性成分分离中应用的技术领域，具体涉及党参内酯分子印迹聚合物的制备及利用该聚合物为固相萃取剂分离、纯化天然产物中的党参内酯的方法。

背景技术：

(1)党参，桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川党参Codonpsistangshen Oliv.的干燥根。党参内酯是其主要有效成份，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。

(2)中草药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分。为了提高中草药的治疗效果，就要尽最大限度提取有效成分，去除无效成分及有毒成分。因此，中草药活性成分分离提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效都极为重要。传统中药活性成分的分离提取常采用硅胶柱、C₁₈键合相柱、Al₂O₃柱等利用成分的吸附系数差异实现分离，但最大缺点是选择性差，富集容量低，尤其对一些结构复杂，多手性碳原子，且含量低的活性化合物，分离提纯难度大，采用这些常规分离手段往往需要反复操作，提取率极低，手性构型可能因此改变而失活。分子印迹聚合物是为模板分子量身定做的高分子聚合物，由于其经洗脱模板分子后，能留下在形状、大小以及识别位点都与模板分子相匹配的空穴，该空穴能重新识别模板分。由于其兼有高效、稳定和特异选择性且合成价格低廉的特点，因而具有较广泛应用前景。

发明内容：

本发明的目的在于避免上述传统提取方法技术存在的问题，建立一种基于党参内酯分子印迹聚合物为新型吸附分离材料，并以此作固相萃取柱的固定相从中药粗提物中定向分离、富集、纯化党参内酯的方法，由此可以获得高提取率的目标成分。本发明通过以下的技术方案实现的，具体包括步骤如下：

1.党参内酯分子印迹聚合物的制备：

(1)将党参内酯、功能单体和交联剂按照摩尔比1∶4∶20溶解在装有68mL致孔剂乙腈溶液的圆底烧瓶中；

(2)再加入引发剂偶氮二异丁腈78mg后，通氮气脱氧15min；

(3)将密封好的圆底烧瓶放入60℃的水浴中，恒温聚合24h得到聚合物；

(4)将制得的聚合物用甲醇-冰醋酸(9∶1，V/V)混合液为萃取剂，通过索氏提取的方法洗去模板分子及没有聚合的功能单体及交联剂，以紫外光谱进行检查直至检测不到以上物质的吸收为止，然后用甲醇除去残留的冰醋酸；

(5)将除去模板分子的聚合物在60℃干燥2h，获得党参内酯分子印迹聚合物；

(6)非印迹聚合物的制备方法，除不加入模板分子外，其余步骤同上。

2.固相萃取分离纯化中药粗提液中的党参内酯：

(1)固相萃取分离纯化中药粗提物中的党参内酯：称取党参药材粉末(过50目筛)5.0g，加入甲醇提取液40mL，浸泡1h后，放入超声波中超声40min后，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并定容至5mL，备用；

(2)将上述得到的党参内酯分子印迹聚合物采用干法装柱填充到固相萃取柱中，并用甲醇溶液平衡柱子；取党参药材粗提取液5mL上样后，用甲醇洗脱保留在萃取柱中的党参内酯，将洗脱液收集并浓缩、干燥，即得到高纯度的党参内酯。

本发明制备的分子印迹聚合物形貌为规则球形且单分散，粒径5μm左右，对党参内酯具有很好的识别性能，作为固相萃取的填料，可用于中药中党参内酯成分的高效分离、富集及纯化。

与C₁₈键合固相萃取柱，硅胶固相萃取柱及Al₂O₃固相萃取柱相比，党参分子印迹固相萃取柱对提取液中的党参内酯有更好的选择性，柱容量最高，达到8.6μmol/g，是C₁₈键合固相萃取柱和硅胶固相萃取柱的2-3倍，Al₂O₃固相萃取柱的10倍。同时洗脱率达到93％，亦高于其它吸附剂固相萃取柱。

附图说明：

附图1为党参内酯分子印迹聚合物合成示意图，表明党参内酯与功能单体1-乙烯基咪唑之间通过氢键发生分子间作用力，交联剂在引发剂热引发下发生聚合反应后，固定了党参内酯和1-乙烯基咪唑形成的复合物，洗脱模板分子后留下作用位点的空腔，得到印迹聚合物；图2是聚合物微粒的形态电镜扫描图，放大6000倍，粒径在5μm左右。

具体实施方式：