[发明专利]一种不含抗性标记的鼠伤寒沙门氏菌基因缺失突变菌株、疫苗及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种不含抗性标记的鼠伤寒沙门氏菌基因缺失突变菌株，同时还涉及一种不含抗性标记的鼠伤寒沙门氏菌基因缺失疫苗及该菌株在制备疫苗中的应用，属于动物细菌基因工程技术领域。

背景技术

鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium，St）属于沙门氏菌属B群，是一群宿主非特异性肠道致病菌，具有广泛的宿主谱，存在于许多家禽（鸡、鸭、鸽等）、家畜（猪、牛、羊、马、狗、猫等）、鼠类、飞鸟及人类的肠道中。根据糖发酵和酒石酸盐利用实验，可将本菌分成38个生物型，利用噬菌体可将其分为207个噬菌体型（陆承平. 2001. 兽医微生物学（第三版）.北京：中国农业出版社. 223-231）。在鸡白痢已控制的地区，本菌是鸡群中最多见的沙门氏菌感染菌型之一。它具有极广泛的致病性，能致各种畜禽、特种经济动物、试验动物及人的副伤寒，表现为胃肠炎或败血症。这些年来，副伤寒发病率逐年增高，在牛、羊和马中所致的流产及急性胃肠炎的频率已超过都柏林和马流产沙门氏菌。由沙门氏菌引起的副伤寒不仅给养殖业造成很大经济损失，而且菌体污染肉类食品，继而进入人类食物链而引起人类的食物中毒，成为人类沙门氏菌感染的潜在来源，临床上以急性、发热、恶心、呕吐和腹泻为主要症状，并且常引起医院内婴幼儿感染，严重危害人类健康。因此，鼠伤寒沙门氏菌在公共卫生方面具有重要意义。

目前，临床上常采用药物控制的方法来减轻沙门氏菌的危害（李郁，魏建忠，李超，王伟，王强，滕克东. 2008. 同时感染雏鸡群的两种血清型沙门菌的鉴定及药敏试验. 中国家禽，30(4):45-46）。但是多次反复用药不仅使成本上升，而且带来了耐药性和药物残留等食品安全问题，这表明仅仅依赖药物控制不是治疗该病的上选对策。由于多重耐药沙门氏菌不断出现，以及基于食品安全方面的考虑，疫苗接种免疫预防沙门氏菌病是一个理想的选择。尽管常规灭活疫苗一直在使用，但由于其产生的保护水平低且持续时间短，以及免疫途径不方便等原因，使得常规疫苗的使用效果不理想（张欣. 2001. 减毒沙门氏菌活疫苗研究现状及其在家禽业的应用.中国家禽，23(20):44-46）。

与灭活疫苗和亚单位疫苗不同，减毒沙门氏菌活疫苗能更有效地激发宿主的体液免疫、细胞免疫以及局部黏膜免疫反应（朱麟，王红宁. 2008. 禽用减毒沙门菌活载体疫苗的研究进展. 中国家禽，30(21):27-30; Spreng S, Dietrich G, Weidinger G. 2006. Rational design of Salmonella-based vaccination strategies. Methods, 38(2):133-143）。据报道，用减毒或无毒活菌注射或口服免疫动物，效果优于灭活菌苗（陆承平. 2001. 兽医微生物学（第三版）.北京：中国农业出版社. 223-231）。目前针对动物鼠伤寒沙门氏菌病的疫苗主要有鼠伤寒沙门氏菌灭活疫苗和鸡用鼠伤寒沙门氏菌活疫苗Zoosaloral H、牛用鼠伤寒沙门氏菌活疫苗Zoosaloral R及鸽用鼠伤寒沙门氏菌活疫苗Zoosa T。Zoosaloral H、Zoosaloral R和Zoosa T是利用甲基硝基亚硝基胍经化学诱变方法得到的一种鼠伤寒沙门氏菌DT009株腺嘌呤(Ade^-)和组氨酸(His^-)营养突变体(Frech G, Weide-Botjes M, Nussbeck E, Rabsch W, Schwarz S. 1998. Molecular characterization of Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium DT009 isolates: differentiation of the live vaccine strain Zoosaloral from field isolates. FEMS Microbiol. Lett. 167(2):263-269)。另外一种鸡用鼠伤寒沙门氏菌活疫苗AviPro                                                Salmonella vac T是鼠伤寒沙门氏菌415株的代谢漂移突变株(Linde K, Beer J, Bondarenko V. 1990. Stable Salmonella live vaccine strains with two or more attenuating mutations and any desired level of attenuation. Vaccine. 8(3):278-282; Methner U, Barrow PA, Martin G, Meyer H. 1997. Comparative study of the protective effect against Salmonella colonisation in newly hatched SPF chickens using live, attenuated Salmonella vaccine strains, wild-type Salmonella strains or a competitive exclusion product. Int J Food Microbiol. 35(3):223-230)。人的鼠伤寒沙门氏菌病尚无疫苗供预防使用。