[发明专利]一种在丝状噬菌体上高密度表达目的多肽的方法和应用

权利要求书

1.一种在丝状噬菌体上高密度表达目的多肽的方法，其特征在于包含下列步骤：

（1）人工序列的设计与合成：用化学方法合成二条5′端分别有EcoRI和BamHI核酸内切酶位点的互补核苷酸序列，其含有能表达成肠激酶酶切位点天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸（DDDDK）的核苷酸序列以及目的多肽的核苷酸序列；

（2）序列导入噬菌体载体pC89：将二条互补序列退火后形成的DNA片段与经EcoRI和BamHI酶切的噬菌体载体pC89在DNA连接酶作用下连接，连接产物转化感受态的大肠杆菌（Escherichacoli）细胞，选择性培养基培养，挑单菌落进行阳性克隆鉴定；

（3）重组噬菌体的表达与纯化:阳性克隆加入诱导物和辅助噬菌体进行扩增培养，收获并纯化表达有肠激酶酶切位点DDDDK和目的多肽的重组噬菌体；

（4）将获得的重组噬菌体经肠激酶酶切，得到高密度表达在丝状噬菌体主要衣壳蛋白氨基端的目的多肽。

2.权利要求1所述方法得到的高密度目的多肽作为竞争抗原在免疫学检测方法中的应用。

3.权利要求2所述的应用，其特征在于以所得的高密度目的多肽作为竞争抗原替代人工化学合成抗原用于免疫学检测。

4.权利要求2或3所述的应用，其特征为将所得的赭曲霉毒素 A高密度模拟表位肽、黄曲霉毒素B₁高密度模拟表位肽、玉米赤霉烯酮高密度模拟表位肽、桔霉素高密度模拟表位肽用于免疫学检测。

5.权利要求1所述方法得到的高密度目的多肽作为难以获得或传染性强的病毒抗原的替代品，应用于检测这些病毒的相应抗体。

6.权利要求5所述的应用，其特征为将所得艾滋病病毒高密度抗原表位肽、甲型H1N1流感病毒高密度抗原表位肽、流感病毒H3N2高密度抗原表位肽或丙肝病毒高密度抗原表位肽作为检测抗原，用于免疫学检测。

7.权利要求1所述方法得到的高密度抗原表位肽在制作亚单位疫苗的应用。

8.权利要求7所述应用，其特征在于猪圆环病毒Ⅱ型的高密度抗原表位肽、甲型H1N1流感病毒高密度抗原表位肽、流感病毒H3N2高密度抗原表位肽、丙肝病毒高密度抗原表位肽在制作其亚单位疫苗中的应用。