[发明专利]用6-磷酸葡萄糖酸内酯酶(PGL)来增加异戊二烯及其他产物的产量的组合物和方法

权利要求书

1.一种能够产生异戊二烯的大肠杆菌(E.coli)菌株的重组细胞或其子代，所述细胞包含：(a)编码PGL多肽的异源核酸的一个或多个拷贝，其中所述核酸整合在所述大肠杆菌染色体中；以及(b)编码异戊二烯合酶的一种或多种异源核酸；

其中在所述整合之前，所述大肠杆菌细胞不包含编码PGL多肽的核酸，并且

其中所述所得的重组细胞产生的异戊二烯的滴度大于不包含(a)和(b)的相同细胞的该滴度。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中编码钼摄取多肽的异源核酸的一个或多个拷贝被额外整合在所述大肠杆菌染色体中。

3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述钼摄取多肽选自modF、modE、modA、modB和modC。

4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中编码半乳糖代谢多肽的异源核酸的一个或多个拷贝被额外整合在所述大肠杆菌染色体中。

5.根据权利要求4所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述半乳糖代谢多肽选自galM、galK、galT和galE。

6.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中编码半乳糖代谢多肽的异源核酸的一个或多个拷贝和编码钼摄取多肽的异源核酸的一个或多个拷贝被额外整合在所述大肠杆菌染色体中。

7.根据权利要求6所述的重组大肠杆菌细胞，其中(a)所述PGL多肽是大肠杆菌PGL多肽；(b)所述钼摄取多肽选自modF、modE、modA、modB和modC；并且(c)所述半乳糖代谢多肽选自galM、galK、galT和galE。

8.根据权利要求7所述的重组大肠杆菌细胞，其中编码所述PGL多肽、半乳糖代谢多肽和钼摄取多肽的核酸是如图20中所示17,257碱基对片段的一部分。

9.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述细胞产生异戊二烯的比产率高于不包含(a)和(b)的相同细胞的该比产率。

10.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述比产率为至少15mg/OD/h。

11.根据权利要求7所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述编码PGL多肽、钼摄取多肽和/或半乳糖代谢多肽的核酸来自大肠杆菌菌株K12MG1655或为大肠杆菌菌株K12MG1655的衍生物。

12.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述细胞属于大肠杆菌菌株B。

13.根据权利要求12所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述细胞属于大肠杆菌菌株BL21。

14.根据权利要求12所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述细胞属于大肠杆菌菌株BL21(DE3)。

15.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，还包含(c)编码甲羟戊酸(MVA)途径上游的多肽和/或MVA途径下游的多肽的异源核酸。

16.根据权利要求7所述的重组大肠杆菌细胞，还包含(d)编码甲羟戊酸(MVA)途径上游的多肽和/或MVA途径下游的多肽的异源核酸。

17.根据权利要求15或16所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述MVA途径上游的多肽选自：(i)乙酰乙酰基辅酶A合酶(硫解酶)多肽；(ii)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶多肽；以及(iii)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶多肽。

18.根据权利要求15或16所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述MVA途径下游的多肽选自：(i)甲羟戊酸激酶(MVK)；(ii)磷酸甲羟戊酸激酶(PMK)；(iii)二磷酸甲羟戊酸脱羧酶(MVD)；以及(iv)异戊烯基二磷酸异构酶(IDI)。

19.根据权利要求16所述的重组大肠杆菌细胞，其中(a)所述PGL多肽是大肠杆菌PGL多肽；(b)所述钼摄取多肽选自modF、modE、modA、modB和modC；并且(c)所述半乳糖代谢多肽选自galM、galK、galT和galE。

20.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌细胞，其中所述异戊二烯合酶多肽来自银白杨(Populus alba)。