[发明专利]用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料

说明书

领域

本发明涉及用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料及其制备方法。支架材料包含来自鱼皮的脱细胞细胞外基质。

背景

目前将多种人、动物和合成材料描述或用于医学程序以增强、修复或纠正组织缺陷。

例如美国公布专利申请号2003/0059460公开一种杂化聚合物材料，其包含可用于活体组织再生的合成和天然聚合物。杂化物包含交联的天然存在的聚合物和生物降解-可吸收的合成聚合物。但是，必须采取一系列复杂的加工步骤以制备该杂化材料。此外，所得杂化材料含有合成以及天然存在的材料。

美国专利号6,541,023描述来自鱼皮的多孔胶原凝胶用作组织工程支架的用途。制备胶原凝胶包括研磨鱼皮。另外，中国专利号1068703描述制备用于敷裹烧伤创伤的鱼皮的方法，包括从鱼体分离鱼皮，将该皮肤置于足以建立2.5-3的pH值的量的碘酊、乙醇、樟醇、磺胺嘧啶锌和盐酸的防腐液中。但是，这些产物可能难以处理，因为美国专利号6,541,023的产物为凝胶形式，中国专利号1068703的产物贮存于溶液中。

此外，源自人皮肤(ALLODERM?再生组织基质(LifeCell))；胎牛真皮(PRIMATRIX?皮肤修复支架(TEI Biosciences))；猪膀胱(MATRISTEM?细胞外基质创伤片(Medline Industries, Inc.))；和猪小肠黏膜下层(OASIS?创伤基质(Healthpoint Ltd.))已产生多种用于医疗用途的细胞外基质产物。但是，需要改良的产品和方法以增强创伤愈合和组织修复。本发明满足这种需要。

概述

脊椎动物的细胞外基质(ECM)是包围和支持细胞的复杂结构实体。ECM由结构蛋白的复杂混合物组成，其中最丰富的是胶原，及其它特化的蛋白和蛋白聚糖。本文描述的支架材料是来自鱼皮的天然生物ECM组分的非常完整的无细胞支架。该支架还可包含来自鱼皮的天然存在的脂质。皮肤ECM的天然三维结构、组成和功能基本不变，并提供支架以支持细胞移行、粘附、增殖和分化，由此促进组织的修复和/或更换。本发明还涉及该支架材料的制备方法和使用方法。

附图简述

图1显示根据本文所述方法用鱼皮制备的脱细胞ECM产物(支架材料)的示例性样品；

图2显示以100x (2A)和400x (2B)放大的支架材料横截面的光学图像；

图3显示以300x (3A)和600x (3B)放大的支架材料横截面的扫描电镜(SEM)图像。

描述

本发明的支架材料由完整鱼皮获得。图1显示示例性样品，其显示支架材料样品的外观。任何物种的鱼，包括硬骨鱼或软骨鱼，都可用作鱼皮来源。例如来源可以是圆型鱼如鳕鱼、黑线鳕和鲶鱼；比目鱼，如大比目鱼、鲽鱼和鳎鱼；鲑鱼如大马哈鱼和鳟鱼；鲭科如鲔鱼；或者小型鱼如青鱼、凤尾鱼、鲭鱼和沙丁鱼。在某些实施方案中鱼皮由冷水多脂鱼和/或已知含有大量ω-3油的鱼获得。ω-3油高的鱼的实例是大马哈鱼、青鳞鱼、鲔鱼、青鱼、鳕鱼、沙丁鱼、鲭鱼、裸盖鱼(sable fish)、胡瓜鱼、白鲑、南极鳕鱼(hoki fish)和一些鳟鱼品种。

在加工之前从鱼去除鱼皮。如果鱼皮来自有鳞品种的鱼，应当将鱼皮去鳞以便除去实质部分的鳞或者至少从鳞除去羟磷灰石。短语“除去实质部分的鳞”或者“基本无鳞”指除去鱼皮上至少95%，优选至少99%，更优选100%的鳞。“基本无鳞的”鱼皮还可指来自无鳞品种鱼的鱼皮。要么在所有加工之前，用单纯的机械压力(通过例如刀、与研磨剂一起振荡、水压、使用与刀相同的机械力的专用去鳞设备或其它压力设备，如用陶瓷或塑料抛光)除去鳞，要么在某种化学处理(如脱细胞)之后除去鳞，然后用机械压力洗掉鳞。如果将鱼皮首先化学和/或酶处理(如用TRITON? X-100处理)，机械压力一般需要柔和，因为在脱细胞之后皮肤更容易撕裂受损。可以多于一个的步骤去鳞，例如在脱细胞前部分除去，接着在脱细胞期间和/或之后进一步除去。或者可以只通过化学处理去鳞。

在鳞已除去后，将鱼皮在脱细胞前任选冷冻。可通过将皮肤培养在液氮中或者用其它可将皮肤冷冻至-70℃或更低的专用冷冻装备将鱼皮快速冷冻，以保存支架的胶原结构。或者，可将鱼皮冷冻在通常见于鱼厂的常规类型冷冻库中。冷冻过程可溶解或部分溶解构成完整鱼皮的细胞，帮助促进鱼皮脱细胞。如果鱼皮已冷冻，可将其稍后解冻用于进一步加工。