[发明专利]能够识别来自巨细胞病毒的抗原的T细胞受体

说明书

发明领域

本发明涉及能够识别来自巨细胞病毒(CMV)的抗原的T细胞受体(TCR)。本发明还涉及TCR基因转化以产生CMV特异性T细胞的用途，以及它们用于治疗和/或预防CMV疾病的用途。

背景技术

巨细胞病毒是人类的常见病原体，并且其通常与无症状原发感染、以及随后的病毒持续性或潜伏期阶段相关。在先天性或获得性免疫缺陷患者以及进行实体器官或骨髓移植的患者中，原发CMV感染和持续的CMV的再活化经常与威胁生命的侵袭性内脏疾病相关。

同种异体造血干细胞移植(Allo-HSCT)后的潜伏期人疱疹病毒、巨细胞病毒(CMV)的再活化能导致显著的发病率和死亡率，除非迅速进行治疗。抗病毒治疗通常是有效的，但具有严重的副作用，诸如骨髓抑制(Ganciclovir^TM)或肾毒性(Foscarnet^TM)

在UK和欧洲已经在临床I/II期试验中测试了CMV的细胞免疫治疗。在这些试验中，从CMV血清反应阳性供体的外周血中分离CMV特异性T细胞，并再输入至CMV再活化后的接受者中，从而产生持久的抗病毒反应。CD8+CMV-特异性细胞毒T-细胞(CTL)的移植后复原消除了CMV相关疾病的发生。CMV再活化的细胞治疗的优势是免疫记忆的转移，这能减少随后再活化的数量。

在UK进行了越来越多的高度免疫抑制(或T细胞排除)减少的强度调节Allo-HSCT。该方法降低了在患有更多并发病老年患者中移植的毒性。因此，在Allo-HSCT后更多的患者有CMV再活化的风险。此外，由于这些患者是老年人并且具有其他的并发病，从而使得它们对当前利用的抗病毒药物治疗更不耐受。

由于约50%的成年个体之前已被CMV感染，因此进行了显著量的CMV“错配”Allo-HSCT，即其中供体是CMV血清阴性的，而接受者是CMV血清阳性的。其中供体为CMV血清阴性的移植接受者不会受益于细胞免疫治疗，这是因为缺乏CMV特异性记忆T细胞。因此此类患者具有严重的产生自潜伏CMV再活化的并发症风险。当前，没有从未感染的个体分离病毒特异性T细胞的策略，因为前体频率很低或不存在，并且T细胞反应的体外激发是无效的。

因此存在对治疗或预防CMV疾病，尤其是Allo-HSCT后潜伏CMV再活化的替代方法的需要。而且还存在对用于细胞免疫治疗的CMV特异性T细胞替代来源的需要。

附图简述

图1-逆转录病毒载体构建体pMP71-pp65(α-2A-β)-Cys1的图示。

图2-CMV TCR-转导的人T细胞能通过抗Vβ13抗体鉴定(上图)。CMVTCR-转导的T细胞结合特定四聚体并可在体外扩增(下图)。

图3-由CMV TCR-转导的人T细胞进行的HLA-A*0201-限制性CMVpp65特定性细胞因子的分泌。

图4-X3-PBMC的CMV TCR转导。

图5-CMV-TCR-X3-CD4-cytk

图6-CMV-TCR-X3-CD8-cytk

本发明各方面概述

本发明的发明人组装了对主要CMV基质磷蛋白pp65有特异性的T细胞受体。他们还构建了包含TCRα和β基因的逆转录病毒载体，并且将其用于转导人T细胞。该细胞显示表达CMV pp65特异性TCR并且显示出功能性的抗原特异性活性。

细胞治疗或TCR基因治疗的应用提供了与治疗CMV疾病的常规抗病毒治疗相比的多种优势。

常规应用中的抗病毒药物治疗的施与需要患者是住院病人(Foscarnet^TM)或进行每天两次日间护理(Ganciclovir^TM)。羟甲基无环鸟苷(Ganciclovir)可通过CADD泵(如果有的话)施与。为此涉及NHS消费、健康、社会和心理学，特别是因为治疗的持续时间通常超过2周。相反，细胞治疗的应用需要单次输注T细胞。

还存在细胞治疗转移了免疫记忆的优势，其例如减少了allo-HSCT后的CMV再活化的数量。

因此，在第一个方面，本发明提供了对巨细胞病毒(CMV)磷蛋白pp65特异的T细胞受体(TCR)。

该TCR可从pp65识别表位NLVPMVATV(SEQ ID No.1)。

当由主要组织相容性复合物(MHC)呈递时，该TCR可能能够结合具有氨基酸序列NLVPMVATV(SEQ ID No.1)的肽。

该TCR的α链和β链各自具有三个互补决定区(CDR)。该TCR的α链和β链可具有以下CDR3序列：