[发明专利]基于DNA疫苗和嵌合体病毒的诱导抗登革热病毒的免疫应答的方法、试剂盒、质粒和组合物

权利要求书

1.诱导抗登革热病毒的免疫应答的方法，其特征在于，包括给患者DNA疫苗和17D嵌合体病毒的施药。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过给患者联合施药，在初免(DNA疫苗)和加强免疫(嵌合体病毒)系统或者两个疫苗(以相同形式的DNA疫苗和嵌合体病毒疫苗)的同时共同施药的免疫策略。

3.抗登革热病毒的疫苗组合物，其特征在于，包含：

(a)从包含编码蛋白E的基因或仅包含对应于这些蛋白的区域III的序列的不同重组质粒的构建中产生的抗四种登革热病毒亚型的DNA疫苗，蛋白E来自每个登革热病毒亚型，它们都融合到编码人组织血浆酶原活动子(t-PA)的信号肽的序列中；

(b)嵌合体病毒包含经感染性克隆粘附技术修饰的黄热病疫苗病毒17D，由编码登革热病毒不同亚型的蛋白prM和蛋白E的序列取代编码黄热病毒蛋白prM和蛋白E的序列；以及

(c)药物上可接受的载体。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述DNA疫苗包含：

-质粒pE1，由插入编码来自登革热病毒病毒性包膜(E)蛋白80%的序列构建，不具有登革热病毒蛋白E的C末端部分。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述DNA疫苗包含：

-质粒pE2，由插入编码登革热病毒蛋白E的包含登革热病毒全基因组的核苷酸1822和2125之间的区域III的序列构建。

6.试剂盒，其特征在于，包含：

(a)来自包含编码每个登革热病毒亚型的蛋白E的基因或包含仅对应于这些蛋白区域III的序列的不同重组质粒的构建的抗四种登革热病毒亚型的DNA疫苗，它们的序列都融合到编码人组织血浆酶原活动子的信号肽(t-PA)的序列中；以及

(b)嵌合体病毒包含经感染性克隆粘附技术修饰的黄热疫苗病毒17D，由编码不同亚型的登革热病毒的蛋白prM和蛋白E的序列取代编码黄热病毒蛋白prM和蛋白E的序列。

7.重组质粒，包含蛋白E基因，并且来自每个登革热病毒亚型的蛋白E基因的序列融合到编码t-PA信号肽的序列，其特征在于，由插入每个登革热病毒的没有蛋白E的C末端部分的病毒性包膜(E)的蛋白的80%的序列构建，其中这样的序列是使用如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的正义寡核苷酸链和反义寡核苷酸链放大的，然后介导在质粒pcTPA在编码信号肽t-PA的序列的相同的开放式阅读框内的限制性酶EcoRV和XbaII的酶切位点之间的序列的克隆，从而产生重组质粒。

8.根据权利要求7所述的质粒，其特征在于，编码登革热病毒的病毒性包膜蛋白(E)的80%的序列，该病毒包膜蛋白(E)的序列包含在DENV2,New Guinea C(NGC)菌株的全基因组的核苷酸937和213125之间(Genebank:M29095)。

9.重组质粒，包含蛋白E基因，并且来自每个登革热病毒亚型的蛋白E基因的序列融合到编码t-PA信号肽的序列，其特征在于，由插入编码登革热病毒蛋白E的区域III的序列构建的，其中这样的序列是使用如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：4所示的正义寡核苷酸链和反义寡核苷酸链放大的，在限制性酶EcoRV和XbaI酶切位点之间的，进一步地克隆在限制性酶EcoRV和XbaI酶切位点之间的序列，在编码信号肽t-PA的序列的开放阅读框内，从而生成重组质粒。

10.根据权利要求9所述的质粒，其特征在于，编码登革热病毒蛋白E的区域II的序列，包含在DENV2， NGC菌株 (Genebank: M29095)的全基因组的核苷酸1822和213125之间。