[发明专利]肝损伤的新标志物

说明书

相关申请

本申请要求2009年5月21日提交的美国申请系列号61/180,402的权益。该文件的内容通过提述并入本文。

技术领域

本发明涉及疾病或受损的肝脏的受试者分泌至循环系统中的生物标志物。更具体而言，本发明涉及使用一种或多种本发明的生物标志物来评估受试者的肝损伤的方法。

背景技术

本领域存在许多可用的肝损伤生物标志物，包括，例如，丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)和乳酸脱氢酶(LDH)。肝损伤是美国及其他地区中发病率的主要原因，并且能够由许多因素引起。一个重要因素是以高于推荐剂量的剂量水平摄入对乙酰氨基酚。其他的肝损伤由缺血或再灌注、腹部外科手术、出血性和败血性休克、腹部的其他创伤、肝移植和肝癌引起。

已知的标志物并不完全令人满意，或者因为它们不够灵敏，或者不够有特异性，或者二者兼有。本发明通过介绍14种可以单独使用或作为小组组合使用或与已知标志物组合使用的新颖且灵敏的标志物而改善了这点。

将本文引用的任何文献通过提述以其整体并入，任何涉及的和本领域已知的氨基酸序列或核苷酸序列亦是如此。如此，将作为标志物列出的蛋白质和编码它们的核苷酸序列通过提述并入本文。

发明内容

在一个方面，本发明涉及鉴定具有肝损伤的受试者的方法，所述方法包括分析获得自所述患者的生物体液中选自下组的mRNA或蛋白质的存在、缺失或量的变化：去唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1)、去唾液酸糖蛋白受体2(ASGR2)、甜菜碱-高半胱氨酸S-甲基转移酶1(BHMT)、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、二氢嘧啶酶(DPYS)、果糖、果糖-1-6-二磷酸酶1(FBP1)、延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH)、甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)、羟酸氧化酶1(HAO1)、3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A合酶2(HMGCS2)、L-六氢吡啶羧酸氧化酶(PIPOX)和甲硫氨酸腺苷转移酶1(MAT1A)，其中这些mRNA或蛋白质中的一种或多种在所述生物体液中的水平增加指示肝损伤，或评估编码纤溶酶原(PLG)或视黄醇结合蛋白(retinal binding protein)4(RB P4)的mRNA、或作为纤溶酶原(PLG)或视黄醇结合蛋白4(RB P4)的蛋白质的存在或缺失或量的变化，其中该mRNA或蛋白质在所述生物体液中的水平减少指示肝损伤的存在。

在本发明的方法中，可以将任何前述标志物与一种或多种其他前述标志物组合评估，和/或与本领域已知的另外的标志物如ALT、AST等组合评估。

这些蛋白质的水平可以通过本领域已知的多种方法评估，包括Western印迹、免疫测定法等。在一个实施方案中，可以使用针对多种前述标志物的抗体(如果需要包括针对已知标志物的抗体)的微阵列。Western印迹可允许通过分子量大小来分析，此外，可以采用其他免疫测定方法，包括均相方法、侧流测定法(lateral flow assay)等。流体中的mRNA水平也可以通过本领域已知的方法如逆转录酶PCR(RT-PCR)、Northern印迹等来研究。

本发明还包括用于分析上文所述新标志物中一种或多种的试剂盒。

附图简述

图1显示在三种评估人和鼠类组织中多种基因的表达的平台中确定的RNA水平的编码多种蛋白质的基因的表达水平。

图2显示肝和15种其他正常人组织中多种基因的表达的Western印迹测定结果。

图3显示本发明的生物标志物在施用了毒性剂量的对乙酰氨基酚的小鼠血清中出现的时程。

图4A比较人肝病患者血清中FAH的浓度与对照个体血清中的水平。将这些结果与通过对于肝损伤的标准ALT测试获得的结果相关联。

图4B显示正在恢复中的肝病患者与患有肝癌的患者相比血清中FAH的检测水平的时程，也将其与通过用于肝损伤的标准ALT测试获得的结果相关联。

实施发明的方式

鉴定了在循环系统中可检测的用于肝损伤的十四种新的蛋白质生物标志物；它们中的12种在例如受试者遭受肝损伤时在血清中显示浓度升高，而它们中的两种显示水平降低。这些标志物可以单独使用，或彼此组合使用和/或与已知标志物组合使用以改善疑似具有肝损伤的受试者中的诊断和预后。对这种损伤的恰当评估会报告治疗方案。