[发明专利]脂肪酸衍生物的产生

权利要求书

1.产生脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯混合物的方法，所述方法包括在碳水化合物碳源存在下培养细菌宿主细胞，其中所述细菌宿主细胞经基因工程改造，从而超表达编码EC 3.1.1.5或EC 3.1.2.-中的硫酯酶的基因、编码酰基辅酶A合酶的基因和编码EC 2.3.1.75或EC 2.3.1.20中的酯合酶的基因，其中所述细菌宿主细胞的编码酰基辅酶A脱氢酶、铁色素外膜蛋白受体和DNA结合转录抑制子的基因被减弱，其中所述细菌宿主细胞在所述硫酯酶、酰基辅酶A合酶和酯合酶被超表达的条件下培养，并且其中所述细菌宿主细胞在甲醇的存在而不添加外源乙醇的条件下产生脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯混合物。

2.如权利要求1所述的方法，还包括从宿主细胞的培养物中分离所述脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述编码硫酯酶的基因是tesA、‘tesA、fatB、fatB2、fatB3、fatA1或fatA。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述编码酰基辅酶A合酶的基因是fadD、fadK、BH3103、pfl-4354、EAV15023、fadD1、fadD2、RPC_4074、fadDD、faa39、编码GenBank登录号ZP_01644875蛋白的基因或yhfL。

5.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述编码酯合酶的基因获自不动杆菌(Acinetobacter sp.)、泊库岛食烷菌(Alcanivorax borkumensis)、真养产碱杆菌(Alcaligenes eutrophus)、高山被孢霉(Mortierella alpina)、弯曲隐球酵母(Cryptococcus curvatus)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、亚德海床杆菌(Fundibacter jadensis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、混浊红球菌(Rhodococcus opacus)、除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclastics)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、智人(Homo sapiens)或希蒙得木(Simmondis chinensis)。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述编码酯合酶的基因是wax/dgat、编码蜡合酶的基因或编码双功能的酯合酶/酰基辅酶A:甘油二酯酰基转移酶的基因。

7.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述细菌宿主细胞在包含2g/L至100g/L起始浓度的碳水化合物碳源的培养基中培养。

8.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述碳源是葡萄糖。

9.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述甲醇以1mL/L至100mL/L的浓度存在。

10.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中以1g/L至200g/L的浓度产生所述脂肪酸乙酯。

11.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中培养基中产生所述脂肪酸乙酯的产率为每100g葡萄糖0.5g至30g。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述细菌宿主细胞来自埃希氏菌属(Escherichia)。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述细菌宿主细胞是大肠杆菌细胞。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述细菌宿主细胞是聚球蓝细菌(Synechococcus Sp.)PCC 7002细胞、细长聚球蓝细菌(Synechococcus elongatus)PCC7942细胞、或集胞蓝细菌(Synechocystis Sp.)PCC 6803细胞。

15.基因工程细菌宿主细胞，包含编码EC 3.1.1.5或EC 3.1.2.-中的硫酯酶的基因、编码酰基辅酶A合酶的基因和编码EC 2.3.1.75或EC 2.3.1.20中的酯合酶的基因，其中所述细菌宿主细胞在甲醇的存在而不添加外源乙醇的条件下产生脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯混合物，并且其中所述细菌宿主细胞的编码酰基辅酶A脱氢酶、铁色素外膜蛋白受体和DNA结合转录抑制子的基因被减弱。

16.用于产生脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯混合物的细菌宿主细胞培养物，所述培养物包含权利要求15所述的基因工程细菌宿主细胞，其中当在碳水化合物碳源存在下培养时，所述基因工程细菌宿主细胞在所述细菌宿主细胞培养物的培养基中产生脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯混合物。