[发明专利]生产蜘蛛丝蛋白聚合物的方法

权利要求书

1.一种生产分离的蜘蛛丝蛋白的聚合物的方法，其包括下述步骤：

(i)提供由170至760个氨基酸残基组成的蜘蛛丝蛋白，并且所述蜘蛛丝蛋白包含：

由至少一个100至160个氨基酸残基的片段组成的N-端片段，所述片段源自蜘蛛丝蛋白的N-端片段；和

70至300个氨基酸残基的重复片段，所述片段源自蜘蛛丝蛋白的重复片段；和任选

70至120个氨基酸残基的C-端片段，所述片段源自蜘蛛丝蛋白的C-端片段；

(ii)提供所述蜘蛛丝蛋白在液体介质中的溶液，所述液体介质具有6.4或更高的pH和/或防止所述蜘蛛丝蛋白聚合的离子组成，任选涉及除去脂多糖和其他致热原；

(iii)将所述液体介质的性质调节至6.3或更低的pH和允许所述蜘蛛丝蛋白聚合的离子组成；

(iv)允许所述蜘蛛丝蛋白在所述液体介质中形成聚合物，所述液体介质具有6.3或更低的pH和允许所述蜘蛛丝蛋白聚合的离子组成；和

(v)从所述液体介质中分离出所述蜘蛛丝蛋白聚合物。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤(iii)和(iv)的所述液体介质的pH为6.2或更低，如6.0或更低，和/或其中步骤(iii)和(iv)的所述液体介质的pH为3或更高，如4.2或更高。

3.根据权利要求1-2中任一项的方法，其中步骤(iii)和(iv)的所述液体介质的离子强度在1-250mM的范围内。

4.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中步骤(ii)的所述液体介质的pH为6.7或更高，如7.0或更高。

5.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中步骤(ii)的所述液体介质的pH在6.4-6.8的范围内。

6.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述聚合物是纤维、薄膜、泡沫、网或网状物。

7.根据权利要求6的方法，其中所述聚合物是具有大于0.1μm的直径和大于5mm的长度的纤维。

8.一种生产分离的蜘蛛丝蛋白的二聚体的方法，其包括下述步骤：

(i)提供170至760个氨基酸残基的蜘蛛丝蛋白，所述蛋白包含：

由至少一个100至160个氨基酸残基的片段组成的N-端片段，所述片段源自蜘蛛丝蛋白的N-端片段；和

70至300个氨基酸残基的重复片段，所述片段源自蜘蛛丝蛋白的重复片段；和任选

70至120个氨基酸残基的C-端片段，所述片段源自蜘蛛丝蛋白的C-端片段；

(ii)提供蜘蛛丝蛋白的二聚体在液体介质中的溶液，所述液体介质具有6.4或更高的pH和/或防止所述蜘蛛丝蛋白聚合的离子组成；和

(iii)分离步骤(ii)中获得的二聚体，任选涉及除去脂多糖和其他致热原。

9.根据权利要求8的方法，其中步骤(ii)的所述液体介质的pH为6.7或更高，如7.0或更高。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中提供所述蜘蛛丝蛋白的步骤(i)包括下述子步骤：

(a)在合适的宿主中表达编码所述蜘蛛丝蛋白的多核酸分子；和

(b)分离子步骤(a)中获得的蛋白，任选涉及除去脂多糖和其他致热原。

11.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中步骤(i)中提供的蜘蛛丝蛋白由170至600个氨基酸残基组成，并包含单个源自蜘蛛丝蛋白N-端片段的100至160个氨基酸残基的N-端片段。

12.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中步骤(i)中提供的所述蜘蛛丝蛋白的N-端片段包含至少两个源自蜘蛛丝蛋白N-端片段的100至160个氨基酸残基的片段。