[发明专利]具有乙酰木聚糖酯酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸

说明书

涉及序列表

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发明背景

发明领域

本发明涉及具有乙酰木聚糖酯酶活性的分离的多肽和编码该多肽的分 离的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主 细胞，以及产生和使用所述多肽的方法。

相关技术描述

植物细胞壁多糖构成植物细胞壁的90％并且能够分成以下三组：纤维 素、半纤维素和果胶。纤维素是细胞壁多糖的主要成分。半纤维素是植物细 胞壁中第二丰富的成分。主要的半纤维素聚合物是木聚糖。植物细胞壁中发 现的木聚糖的结构取决于它们的来源可能差异显著，但是它们总是含有 β-1，4-连接的D-木糖主链。β-1，4-连接的D-木糖主链能够用多个侧基取代， 所述侧基如L-阿拉伯糖(L-aribinose)、D-半乳糖、乙酰基、阿魏酰基(feruloyl)、 对-香豆酰基(p-coumaroyl)和葡糖醛酸残基。

木聚糖主链的生物降解依赖于两类酶：内切木聚糖酶和β-木糖苷酶。内 切木聚糖酶(EC 3.2.1.8)将木聚糖主链切割成较小的寡糖，这些寡糖能够进一 步通过β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)降解成木糖。木聚糖的降解中涉及的其它酶 包括，例如，乙酰木聚糖酯酶、阿拉伯糖酶、α-葡糖醛酸糖苷酶、阿魏酸酯 酶和对-香豆酸酯酶。

乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.6)从乙酰木聚糖的β-D-吡喃木糖基残基 (β-D-xylopyranosyl residue)上的2位和/或3位去除O-乙酰基。乙酰木聚糖在 木聚糖的水解中发挥重要作用，因为所述乙酰侧基能够在空间上干扰切割主 链的酶的接近。乙酰侧基的去除促进内切木聚糖酶的作用。基于序列相似性 的糖酯酶分类体系产生了对13个家族的定义，其中的七个含有乙酰木聚糖 酯酶(Henrissat B.，1991，Biochem.J.280：309-316，及Henrissat和Bairoch， 1996，Biochem.J.316：695-696)。

本发明涉及来自棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的乙酰木聚糖酯酶和编 码该多肽的多核苷酸。

根据WO 1995/002689已知来自棘孢曲霉的乙酰木聚糖酯酶 (GENESEQP：AAR63006)；然而，该酶和本发明的乙酰木聚糖酯酶并无显著 的同源性。

根据EP507369已知来自黑曲霉(Aspergillus niger)的乙酰木聚糖酯酶 (GENESEQP：AAR25291)。该酶与本发明的乙酰木聚糖酯酶80％相同。

发明内容

本发明涉及乙酰木聚糖酯酶，所述乙酰木聚糖酯酶具有SEQ ID NO：2中 所示的氨基酸序列，5.0的pI和32.7Da的MW，且具体涉及具有与SEQ ID  NO：2中公开的棘孢曲霉的乙酰木聚糖酯酶同源或相同的氨基酸序列的乙酰 木聚糖酯酶。

在第一方面，本发明涉及具有乙酰木聚糖酯酶活性的分离的多肽，选自 下组：

(a)一种多肽，其包含与SEQ ID NO：2的成熟多肽具有至少85％同一性 的氨基酸序列；

(b)一种由下述多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少高严格条件 下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO： 1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；

(c)一种由如下多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO： 1的成熟多肽编码序列具有至少85％同一性的核苷酸序列；和

(d)SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几 个)氨基酸的变体。

在第二方面，本发明涉及包含编码第一个方面的多肽的核苷酸序列的分 离的多核苷酸。

在第三方面，本发明涉及包含可操作地连接于一个或多个在表达宿主中 指导所述多肽产生的调控序列的多核苷酸的核酸构建体。

在第四方面，本发明涉及包含第三方面的核酸构建体的重组表达载体。

在第五方面，本发明涉及包含第三方面的核酸构建体的重组宿主细胞。