[发明专利]含水转移缓冲液

说明书

相关申请的交叉引用

本发明要求2009年2月23日提交的美国临时申请第61/154,711号以及2009年2月19日提交的美国专利申请第12/709,325号的权益，全部上述申请的所有内容以引用方式全部并入本文，用于所有目的。

发明背景

1.发明领域

本发明属于诸如蛋白和核酸的大分子的电泳转移领域，并特别涉及在分离多肽种类时，电泳后多肽种类从基质向第二基底的转移以用于进一步检测和表征。

2.现有技术描述

电泳是生物学研究的现代实验室中的基本工具。通常，诸如蛋白和核酸的大分子由于在电场中迁移穿过固体基质而在电泳期间分离。在电泳程序结束时，取决于诸如分子量和电荷的分子特性，大分子出现在基质的不同位置。这类大分子的进一步研究通常需要将大分子迁移到允许更好的反应条件的第二基底。电印迹是电泳后转移的一个实例。

多种电印迹方法是领域内公知和常用的。转移过程通常在液体或半液体环境中进行，在该环境中在诸如聚丙烯酰胺凝胶的电泳基质中的大分子被转移到适于进一步分析的第二基质，例如硝酸纤维素膜、尼龙等。大分子从电泳基质向分析基底的运动受到含水转移缓冲液的促进，所述含水转移缓冲液在转移效率中起重要作用。

多种出版物描述了有用于电印迹目的的转移缓冲液，参见，例如Towbin et al.(1979)Proc.Natl.Acad.Sci USA 76：4350-4354；Timmons and Dunbar(1990)Methods in Enzymology 182：679-688。本发明人提供了新的含水转移缓冲液，其提供改善的转移效率，特别是对于相对低分子量范围的多肽。

发明简述

在一方面，本发明涉及用于诸如蛋白和核酸的生物分子从电泳所用的基质向适于另外分析的第二基底电泳转移的含水缓冲液。通常，本发明的含水缓冲液包含浓度为至少300mM的Tris和浓度为至少300mM的甘氨酸。在一些实施方案中，所述缓冲液还可以包含浓度不超过20％重量比的乙醇或甲醇。或者所述缓冲液还可以包含浓度不超过0.1％重量比的诸如SDS的去垢剂。

在一些实施方案中，所述缓冲液包含浓度为约300mM的Tis或其可以包含浓度为约300mM的甘氨酸。在一些情况下，缓冲液的pH为约9.0。在具体实例中，缓冲液具有约300mM的Tris，约300mM的甘氨酸和约9.0的pH。在另一情况下，Tris的浓度为约400mM，甘氨酸的浓度为约400mM并且溶液的pH为约9.0。另一实例中，缓冲液具有约500mM的Tris，约500mM的甘氨酸和约9.0的pH。

在其他实施方案中，本发明的缓冲液包含浓度为约1M或更高的Tris或甘氨酸中的至少一种。例如，缓冲液可以包含约1M的Tris、约1M的甘氨酸并且其pH为约9.0。在另一实例中，缓冲液包含约250mM Tris、约1.92M甘氨酸并且pH为约8.3。

在另一方面，本发明还涉及包含本文所述的含水转移缓冲液的电泳转移设备。在另一方面，本发明涉及利用本文所述的含水转移缓冲液的电泳转移方法。

附图简述

图1A比较了通过SYPRO Ruby强度测量的使用六种不同转移缓冲液的九种蛋白的转移效率。蛋白的分子量如下：肌球蛋白-200kDa；β半乳糖苷酶-116kDa；磷酸化酶B-97kDa；牛血清白蛋白-66kDa；卵清蛋白-45kDa；碳酸酐酶-31kDa；胰蛋白酶抑制剂-21.5kDa；溶菌酶-14.4kDa；抑酶肽-6.5kDa。使用了以下缓冲液：

Towbin-25mM Tris，192mM甘氨酸，pH 8.3

Timmons-250mM Tris，192mM Glycine，pH 8.9

300mM Tris/Gly+M+S-300mM Tris，300mM甘氨酸，20％MeOH，0.05％SDS pH 9.0

300mM Tris/Gly-300mM Tris，300mM甘氨酸pH 9.0

Tim+SDS+MeOH-250mM Tris，192mM甘氨酸，20％MeOH，0.05％SDS pH 8.9

Towbin+SDS+MeOH-25mM Tris，192mM甘氨酸，20％MeOH，0.05％SDS pH 8.3

图1B比较了通过SYPRO Ruby强度测量的使用三种不同转移缓冲液(含有Tris和甘氨酸)的九种蛋白的转移效率。