[发明专利]冻干的达比加群

说明书

本发明涉及冻干形式的式I达比加群，

其在确定达比加群酯的药效学作用的测试中用作校准品的用途，以及该测试本身。

发明背景

式II的达比加群酯为口服的直接凝血酶抑制剂，其用于预防接受全膝或髋关节置换的患者中的血栓栓塞，还适合预防中风，特别是心房纤维颤动患者的中风。

尽管不需要临床监测达比加群酯，但是用于测量达比加群酯的药效学作用的可靠的实验室方法将是有用的。该方法不仅用于监测体内药物活性的动力学，还用于调整药物的给药和剂量(dosing and posology)。通过这样一种方法，可确定患者血液中的药物浓度，其用于避免药物过量。因此，本发明的总的目的在于提供用于分析达比加群酯的药效学作用的测试。

发明详述

本发明具体涉及一种定量测定血样中的达比加群的方法。所述方法包括测定由纯化的人凝血酶引发的凝血时间。

对于达比加群浓度的测定，以下测试原理证明特别有用。为了达比加群浓度的测量，将等分的测试血浆样品用生理盐水稀释。然后通过加入恒定量的高纯度的人凝血酶(α形式)引发凝血。测得的凝血时间直接与测试样品中的达比加群的浓度成正比。

为了能够通过上述策略确定所研究血样中的活性物质的浓度，必须生成校正曲线，使得凝血时间与样品中达比加群的浓度的相关性成为可能。

为了生成该校正曲线，测试产品必须包含确定浓度的达比加群标准品，其可以与测试产品一起运输。在本发明中，术语″达比加群标准品″还可替换为术语″达比加群校准品″。当标准品在-20℃或以上保存时，该标准品必须是稳定的，且药物的量必须恒定。标准品必须容易地在测试系统中应用，以确保可以容易地建立可靠的校正曲线。

式I化合物(达比加群)为易于以不同的多晶形结晶的化合物。而且，该化合物具有吸湿性，从而还导致形成不同的水合物形式。该化合物为略溶的。

本发明的主要目的在于提供一种形式的达比加群，其可作为校准品或标准品用于在凝血时间测试中建立校准曲线。

对于该问题，本发明提出将达比加群转化为如下所示的冻干形式作为其解决方案。

将确定量的达比加群原料药溶于水性酸中，并用水稀释。将该溶液作为储备溶液用于制备不同的达比加群校准品样品。向根据本领域已知方法获得的健康受试者供体(人血浆库)的人抗凝血浆中，加入不同等分的上述达比加群储备溶液，得到不同达比加群浓度的溶液。将指定量的所述不同的溶液转移至合适的管中，并在合适的冷冻干燥设备完全冻干。

因此，本发明涉及制备冻干的达比加群的方法，其包括以下步骤：将达比加群溶于酸性水溶液中，将该溶液加入至人抗凝血浆中，并冷冻干燥所得的溶液。

用于溶解达比加群的酸性水溶液优选特征在于pH≤3，更优选≤2。所述酸优选选自盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸和马来酸。盐酸尤其重要。

所述人抗凝血浆可根据本领域已知方法获得。优选人柠檬酸盐血浆(human citrated plasma)。

本发明的冻干的达比加群易于重构，且因此适用于作为校准品用于测定血样中的达比加群浓度。因此，本发明还涉及根据上述方法获得的冻干的达比加群。

另外，本发明涉及本发明的冻干的达比加群作为校准品在测试中的用途。具体地，本发明涉及本发明的冻干的达比加群作为校准品在抗凝测试中的用途。

本发明的冻干的达比加群的稳定性分别为在37℃至少24小时，以及在4℃和-20℃至少6个月。

本发明还涉及测定血样中达比加群浓度的测试，其包括使用冻干的达比加群作为校准品。本发明还涉及上述测试，其特征在于达比加群的浓度通过测量血样的凝血时间确定。本发明还涉及上述测试，其中凝血通过加入恒定量的高纯度的人凝血酶(α形式)引发。

本发明的另一个目的提供包含本发明达比加群校准品的测试试剂盒。因此，本发明还涉及用于测定血样中达比加群浓度的测试，其包括使用根据上述方法获得的冻干的达比加群。

本发明还涉及试剂盒，其由用于测定血样中达比加群浓度的测试试剂以及根据上述方法获得的冻干的达比加群组成。

本发明还涉及上述试剂盒，其中上述用于测定血样中达比加群浓度的测试试剂包含：试剂1，其为人抗凝血浆，和试剂2，其包括高纯度的人凝血酶(α形式)。在另一优选的实施方案中，上述试剂盒包含冻干形式的试剂1和试剂2。