[发明专利]测定去抑制后酶活性的方法和设备

权利要求书

1.一种测定样品中酶活性的方法，该样品含有至少一种酶和至少一种与所述酶相对应的酶抑制物，测定去抑制后释放的酶活性方法如下：在样品中加入底物，记录至少一种反应产物(酶切产物)浓度随时间的变化，其中所述酶的特异性底物所含的荧光部分在该酶反应中被切断，可在与要检测的酶活性明确相关的波长范围内检测其荧光(测定参数)；其特征在于，所述去抑制是通过在样品中浸入结合有抑制物结合基质的刚性载体而实现。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体是共价结合于抑制物结合物质的纤维素。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，以化学或光化学方法进行抑制物质与纤维素的结合。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述去抑制在4-30℃之间，优选在20℃下进行，方法是将共价结合于抑制物结合物质的纤维素条带浸入样品中，样品退出去抑制反应后，取这种去抑制样品的一部分用于酶活性测定。

5.如以上任何一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述去抑制在第一温度控制反应容器中于恒温下进行，所述与荧光底物的酶反应在移入一部分去抑制样品的第二温度控制反应容器中于恒温下进行，然后在检测容器中测定荧光强度。

6.如以上任何一项权利要求所述的方法，其特征在于，按照离轴法或落射荧光法测定发射荧光。

7.如以上任何一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述酶是蛋白酶，所述荧光底物是寡肽，其N-末端受保护基团保护。

8.如以上任何一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述N-端保护基团是羧基苄基。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述寡肽是二肽，其C-端结合于7-氨基-4-三氟甲基香豆素。

10.实施以上权利要求1-9任何一项所述方法所用的设备，其具有：

-用于去抑制的第一温度控制反应容器，

-用于一部分去抑制样品进行酶反应的可密闭的第二温度控制反应容器，和

-作检测容器，在其中测定发射荧光的第三反应容器。

11.如权利要求10所述的设备，其特征在于，载体是针状，是优选的自动驱动进料系统或手提设备的一部分。

12.如权利要求11所述的设备，其特征在于，进料系统是荧光读数计的一部分。

13.如以上权利要求11或12所述的设备，其特征在于，所述手提设备与荧光计联用。