[发明专利]一种毛囊干细胞的分离培养方法

权利要求书

1.一种毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述方法是利用器官培养的方法，采用William’s E完全培养基对毛囊进行培养并分离纯化出毛囊干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中所采用的William’s E完全培养基为在William’s E基本培养基中添加以下成分：10纳克/毫升的表皮生长因子，5微克/毫升的胰岛素，1微克/毫升的氢化可的松，5.8毫摩尔/升的L-谷酰胺，0.115微克/毫升的维生素A，1微克/毫升的维生素D2，1微克/毫升的转铁蛋白，100纳克/毫升的亚油酸，20微克/毫升的牛血清白蛋白，200单位/毫升的青霉素钠，200单位/毫升的硫酸链霉素；优选地，所述William’s E完全培养基中还包括体积百分含量为15％的胎牛血清。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述培养毛囊的条件如下：37℃、5％CO₂和100％湿度。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括采用消化液纯化通过器官培养法获得的毛囊干细胞的步骤；优选地，所述消化液为包含质量百分含量为0.1％的胰酶和0.008％的EDTA的硫酸缓冲液；更优选地，所述纯化步骤如下：在20～30℃下，用消化液消化从毛囊长出的细胞，清洗，再用该消化液于37℃下继续消化3-5分钟，用磷酸缓冲液收集消化的毛囊干细胞，离心后进行传代或冻存。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括传代和增殖纯化的毛囊干细胞的步骤；优选地，所述传代和增殖的条件如下：William’s E完全培养基，37℃、5％CO₂、100％湿度，2-3天更换一次培养液。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括鉴定所制备的毛囊干细胞的步骤；优选地，所述鉴定方法选自细胞形态结构鉴定、mRNA水平鉴定和蛋白质水平鉴定。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中的毛囊来自哺乳动物皮肤；优选地，所述毛囊来自哺乳动物触须，优选为大鼠触须。

8.权利要求1至7中任一项所述的方法所制备出的毛囊干细胞。