[发明专利]一种细菌检测方法及装置

说明书

技术领域

本发明涉及细菌的检测，具体地说是一种基于特异反应底物方法进行细菌自动截留和检测的方法及装置。

背景技术

地表水、地下水，甚至雨水中含有多种细菌。尤其是当水体受到人畜粪便、生活污水或某些工农业废水污染时，水体中的细菌会大量增加。因此，对水的细菌学检验，特别是肠道细菌的检验，在卫生学上具有重要的意义。其中总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌已被广泛用作水体安全评估的重要常规微生物检测指标，通过它们及其它细菌的检测，可以判断水体卫生学质量，确保人们饮水安全。

在现有的水体细菌检测方法中，普遍采用液体培养或膜过滤后固体平板培养的细菌扩增模式，在细菌浓度达到较高水平时进行人工计数或者显色观察。该类方法往往需要繁琐的手工操作，包括样品稀释、人工接种、观察计数和验证实验等，导致检测耗时很长，通常可达24-72小时甚至更久。因此，上述传统水体细菌检测方法不仅费时、费力，而且在繁琐的操作过程中有可能发生二次污染。

此外，利用传统实验室手段对江河、湖库、泳池、景观场所的水体进行细菌检测时，往往需要大体积采样，并要保证水样运输时间常温下不超过2小时，或者10摄氏度冷藏保存不超过6小时，这给细菌日常监测带来了极大不便，更无法满足人们对水环境安全日益提高的检测需求。

目前，快速、便捷而又稳定的基于特异反应底物的生化分析法凭借其易于观察识别和实现自动化等特点，已经成为水中细菌检测方法的主要发展趋势，得到人们的极大关注，并且已有采用该方法进行水质细菌在线检测的研究，而且用于水质细菌检测的在线仪器已经问世，比如挪威Colifast AS公司的colifast和法国赛环的Colilert3000水质大肠菌在线监测仪。该类仪器利用大肠菌代谢产生的特异指示酶，水解相应的发光或显色底物，通过光学监测，对大肠菌进行定性和定量分析。该方法的检测时间由初始大肠杆菌数量决定，初始菌量越大，则检测时间越短。与传统方法相比，在线仪器能够缩短检测时间至4-18小时。此外，该类仪器能够实现水体的单管连续监测，降低综合检测成本，提高检测效率，为建立完备的水质监测系统和保障水体微生物卫生安全提供了重要平台。

基于特异反应底物的细菌在线检测方法能够实现对水体细菌的在线检测，但还存在以下不足：

1、浓度低，检测时间长

上述检测方法是从水体直接取样并对样本培养检测，而检测时间与水体中的初始菌量相关：若水体中的细菌量较少，则检测就需要花费较长的时间，检测效率较低，在这种情况下，上述方法就无法满足对水体的快速检测需求；

2、水体背景影响大，检测准确度低

由于上述检测方法均是从水体直接取样培养检测，水体pH值、离子、游离化合物或代谢物等会影响检测结果，无法实现环境水体中细菌的准确定量，检测准确度低。

发明内容

为了解决现有技术中的上述不足，本发明提供了一种基于特异反应底物法的水质细菌检测方法和装置，能够扣除水体背景污染、提高检测初始菌量，缩短检测时间，提高检测结果准确性。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种细菌检测方法，包括以下步骤：

a、采样步骤

待测样本通入中空纤维过滤单元，细菌和/或细菌代谢物被中空纤维膜截留并在过滤单元内积累；

冲洗液通入过滤单元，冲洗中空纤维膜的内侧和/或外侧，将积累的细菌和/或细菌代谢物冲洗出来；

b、培养及检测步骤

培养冲洗出来的细菌和/或细菌代谢物，目标细菌代谢物在培养室内积累；

检测培养室内溶液的信息，得到被测样本中目标细菌的信息。

作为优选，所述待测样本为液态样本。

作为优选，所述液态样本为水样、液态食品、体液样品和饮料。

作为优选，中空纤维膜内径范围为0～1000μm，外径范围为0～1500μm，膜壁滤孔等效过滤孔径范围为0～1.0μm。

作为优选，所述培养室内有培养液。

作为优选，所述冲洗液为液体培养基或缓冲液或清水。

进一步，所述冲洗液和/或培养液中有特异性反应底物。

作为优选，监测过滤单元流路的压力。

作为优选，清洗液冲洗中空纤维膜的内侧和/或外侧和/或检测室，对细菌检测流路清洗消毒。

作为优选，检测培养室内溶液中原成分或目标细菌代谢物的信息。

作为优选，在步骤b中，检测培养室内溶液的吸光度或透光率或荧光强度。

作为优选，在步骤b中，根据检测得到的培养室内溶液的信息，判断样本中是否含有细菌；