[发明专利]一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干粉针剂

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干粉针剂及其制备方法。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是人类最常见的自身免疫性疾病之一，患病率约1％，与人类白细胞抗原DR4/DR1明显相关，具有一定的遗传倾向。RA的临床特征多为手、足、腕、膝、臀等的关节滑膜发炎，最终导致关节损伤。滑膜炎引起大量淋巴细胞浸润，主要包括巨噬细胞、T淋巴细胞和浆细胞，同时血管增生。关节损伤主要发生于滑膜与软骨和骨毗邻处。

肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor Alpha，TNFα)和淋巴毒素(Lymphotoxin，LT)是通过与其共同受体TNFR75和TNFR55结合而发挥生物学作用的，大量实验证据表明可溶性TNFR75和TNFR55(即受体的膜外部分)可以通过与TNFα和LT的有效结合而阻断TNFα和LT在生物体内的生物学作用。

TNFα抗体治疗RA的原理是细胞因子之间能相互诱导促成或抑制，形成所谓的细胞因子网络。细胞因子网络失调是RA的主要发病机制及病理原因。炎性滑膜内，不仅促炎细胞因子水平上调，抗炎细胞因子以及包括可溶性受体在内的细胞因子抑制剂也上调了。20世纪90年代早期，人们发现TNFα、IL-1、IL-6、GM-CSF、IL-8等都出现在滑膜中并促进炎症发生。TNFα成为有效的RA治疗目标的证据主要有三个方面：(1)类风湿性滑膜细胞离体培养试验，加入抗TNFα抗体(抗-TNFα)能使培养物中IL-1的生物活性降低，后来发现滑膜中GM-CSF、IL-6、IL-8水平也降低，表明IL-6、GM-CSF、IL-8阻断能使其他促炎因子的生成减少；(2)用抗体或TNF受体(TNFR)-Fc融合蛋白来抑制TNFα，对II型胶原诱导的关节炎模型动物有明显益处，即使在疾病发作后再开始治疗，多数情况下效果也很显著；(3)免疫组织学方法证实，受LPS刺激后，新冷冻组织中TNF及其受体的表达上调，说明TNF与其受体间的相互作用在体内非常重要，进一步表明TNFα可能是很好的RA治疗目标。

目前用于临床的TNFα阻断药物都是生物蛋白类药物，或是基于受体的药物，或是抗体。其主要优点是特异性很强，但缺点也很明显，如质量不稳定、复溶效果不好等。

发明内容

本发明提供了一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干粉针剂及其制备方法。该重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂，含有人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白和药理允许的保护剂和缓冲剂。

保护剂选自蔗糖、聚乙二醇、聚乙烯片吡咯烷酮、甘露醇、海藻糖、乳糖、右旋糖苷和葡萄糖中的一种或多种；缓冲剂选自氨丁三醇、醋酸钠、柠檬酸钠和磷酸二氢钠中的一种或多种。优选地，保护剂选自蔗糖、聚乙烯片吡咯烷酮和右旋糖苷中的一种或多种；缓冲剂选自醋酸钠或氨丁三醇。

优选地，所述粉针剂含有重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白125份、保护剂比例为10-50份、缓冲剂比例为0.5-2份。更优选地，含有重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白125份、保护剂比例为35-45份、缓冲剂比例为1.0-1.4份。进一步优选地，含有125重量份的重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白、45重量份的保护剂、1.4重量份的缓冲剂。

重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白制备过程中所选的过滤系统的滤膜或滤芯材质为混合纤维素、醋酸纤维素、硝酸纤维素、活性炭纤维、玻璃纤维、加强型尼龙、聚偏二氟乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚醚砜或尼龙66中的一种或多种，孔径为0.22μm。该过滤系统不仅可以有效截留细菌和细菌孢子，药液残留少，达到快速除菌的效果，而且不吸附蛋白，保证了该制剂的成品率。

重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂的制备方法，包括以下步骤：称取重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白、保护剂和缓冲剂，加预冷至4～10℃注射用水充分混匀，用盐酸或氢氧化钠调其pH至7.1-7.7，药液经0.22μm的的除菌过滤系统除菌过滤。得rhTNFR-Fc半成品；冷冻干燥得重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白粉针剂。

其中所述冷冻干燥具体包括以下步骤：

1)预冻阶段：预冻温度为-45℃～-30℃，保持预冻温度1～3小时；

2)升华干燥阶段：真空度1～3bar，温度为-35℃～-25℃，保持6～12小时；

3)解析干燥阶段：真空度1～3bar，分别在-20℃、-15℃、-10℃、-5℃、5℃、10℃、20℃、30℃各恒温干燥2～6小时。