[发明专利]能防治茄子青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料

说明书

一、技术领域

本发明涉及能防治茄子青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料，属于农业集约化生产技术，专用于防治茄子青枯病问题。

二、背景技术

茄子青枯病是由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum) 侵染所致，是一种细菌性土传疾病。茄子在世界各地均有栽培，茄子青枯病已成为影响茄子高产的主要障碍，在我国，主要是长江流域普遍受其为害，一般可减产20 %~30 %，严重时损失50 %~60 %。特别是近年来随着蔬菜生产集约化程度的提高，该病已成为茄子的主要病害，而且很难根除，迄今为止还没有发现有效的杀菌剂。

另一方面，水稻、小麦、玉米、油菜等作物秸秆就地焚烧、规模化养殖后的畜禽粪便随地弃置等，使大量的养分资源流失于土壤-植物系统之外，不仅严重污染了环境，也极大地浪费了能作为有机肥和生物有机肥生产原料的有机物资源，不利于我国农业的可持续发展。如何将从土壤中因作物收获而取走的营养元素最大限度地归还到土壤中去，唯一的途径就是将这些固体有机废弃物制成商品有机肥料再施入土壤。将这些固体有机废弃物经过高温发酵合成高品位的有机堆肥，再用作功能菌的载体，制成功能明确的微生物有机肥料，具有广阔的应用前景。

三、发明内容

1. 技术问题  

本发明的目的在于研制一种能防治茄子青枯病的微生物有机肥料，对茄子青枯病的防治效率达到80%以上，使大量的茄子连作障碍土壤得到生物修复，确保集约化农业的顺利发展。

技术方案

一株能克服或消除连作茄子青枯病的拮抗菌菌株II-36，属于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。保藏日期 2010年9月14日，保藏号分别为CGMCC NO.4158 ；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。

菌株II-36的主要生物学特性为：革兰氏染色阳性G⁺，细胞为杆状，过氧化氢酶阳性，淀粉水解阳性，V.P.反应阳性，甲基红试验阴性，纤维素分解阴性，明胶水解阳性，硝酸盐还原阳性，吲哚试验阳性，能利用柠檬酸盐，能产氨，发酵葡萄糖产酸产气，发酵L-阿拉伯糖、甘露糖只产酸。

用上述能防治茄子青枯病的拮抗菌菌株II-36所生产的微生物有机肥料中拮抗菌含量达1×10⁸ cfu·g^-1以上，全氮含量为4~5%（90%以上为有机氮），总氮磷钾养分为6~10%、有机质含量为30~35%。其生产方法包括：

1）将拮抗菌II-36接种到改良牛肉膏液体培养基，分别进行发酵生产，发酵生产的条件为：培养温度范围30~35℃，搅拌速度为180~300 rpm，发酵中后期形成芽孢，使发酵液中含菌或芽孢量≥1×10¹⁰ cfu·ml^-1。所用改良牛肉膏培养液配制方法为：玉米粉5g，牛肉膏2g，氯化钠5g，麸皮5g，土豆淀粉5g，定容至1000 ml，pH值调至7.2-7.4，121℃灭菌20 min。

2）将拮抗菌菌株II-36与腐熟后的猪粪堆肥和菜粕微生物酶解物的混合物进行固体发酵，每吨固体有机物料中加入拮抗菌液50L，固体发酵过程中每天翻堆1次，使固体发酵温度不超过50℃，一般发酵5天后结束，使拮抗菌含量达到1×10⁸ cfu·g^-1以上，获得猪粪堆肥和菜粕微生物酶解混合物的拮抗菌II-36微生物有机肥料。其中：

腐熟后的猪粪堆肥：发芽指数为98%以上,有机质质量比含量≥35%，有机氮质量比含量为1.2-2%，含水量质量比25-30%。

菜粕的微生物酶解物制备方法为，将保藏号为CGMCC NO.1543的嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）菌株37-1发酵液加入到菜粕原料中，调节含水量55-65%和pH 6.0-7.5，进行开放式固体发酵，待发酵温度上升至50℃时立即开始翻堆，以后每天翻堆，使堆温始终维持在35-50℃共5天，固体发酵开始后，堆物的pH会不断上升，每次翻堆时用含酸液体调节含水量和pH，使它们分别维持在55-65%和6.0-7.0，发酵终止时再用含酸液体进行喷洒，直至堆物pH调整为5.0，再进行低温干燥或自然凉干，即为菜粕的微生物酶解物；