[发明专利]动物源性功能性食品中五种磺胺类兽药残留的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物源性功能性食品中兽药残留检测方法，特别涉及磺胺类兽药残留的检测方法。

背景技术

改革开放30年来，功能性食品行业作为21世纪的朝阳产业愈来愈呈现出勃勃生机，功能性食品也逐渐走进了广大人民群众的生活，对促进机体健康、突破亚健康、祛除疾病等方面发挥了重要作用。

动物源性功能性食品如：钙粉、鱼油和蜂蜜等的生产制备多以畜牧、水产动物和半成品为原料，而磺胺类药物因其造价低廉、抗病效果好，被广泛地应用于预防和治疗家畜及水产品的细菌感染性疾病，这就有可能产生多种磺胺类残留。磺胺类兽药残留对人体的直接毒害作用主要包括三种：①对人类胃肠道微生物的影响，国内外近年许多研究认为，有抗菌性药物残留的动物产品，可以对人类肠道的正常菌群产生不良的影响，部分敏感菌受抑制或被杀死，使得正常的微生物环境遭到破坏，有些条件性致病菌(如大肠杆菌等)可能大量繁殖，或易使体外病原菌侵入，损害人类健康。②造成人类病原菌耐药性的增加，使用含抗生素等抗菌药物的饲料后，抗菌药物在动物产品中残留可能使人类的病原菌长期接触这些低浓度的药物，从而产生耐药性。1997年10月首次″抗生素应用于食品动物后对人类医疗影响″国际研讨会，专家一致认为食品动物长期低剂量使用抗生素会增加耐药菌，并且细菌的耐药基因可以在人群中细菌、动物群中细菌和生态系统产生的细菌之间相互传递，由此可导致致病菌产生耐药性而引起人类和动物感染性疾病治疗的失败。③直接导致人类疾病，有许多抗生素残留可以直接导致人体产生疾病。磺胺类药物在奶中残留，不仅能抑制乳产品的发酵，而且还可能使人产生过敏和变态反应。因此，国际食品法典委员会(CAC)、欧盟和美国规定食品和饲料中磺胺类总量不得超过100μg/kg，我国无公害水产品中渔药残留限量标准(NY5070-2002)也规定了水产品中同样限值。同样GB/T 20759-2006中规定了畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的LC-MS-MS法，各种磺胺类药物方法检出限如下：磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶为5.0μg/kg；磺胺二甲基嘧啶为20.0μg/kg；磺胺间二甲基嘧啶为10.0μg/kg；而磺胺喹噁啉目前暂无限量标准。GB/T221316-2007中规定在动物肝、肾、肌肉组织和牛奶中23种磺胺药物残留的定量限均为50μg/kg；在水产品中23种磺胺药物残留的定量限为10μg/kg。

目前，动物源性食品中磺胺类兽药残留量的检测方法主要有薄层色谱法、毛细管电泳法、免疫分析法、高效液相色谱与紫外、荧光技术、电化学检测技术联用等。这些方法都有最低检出浓度高，不能有效排除基质干扰，容易出现假阳性且有机溶剂使用量大等缺点。功能性食品中成分比较复杂，大多含有多种不同成分，这就给检测其中的磺胺类兽药残留带来困难。目前，功能性食品中磺胺类兽药残留检测尚未有文献报道。

发明内容

为了克服已有技术的不足，本发明的目的是提供一种能够有效检测功能性食品中磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺甲基嘧啶(SMR)、磺胺二甲基嘧啶(SDM)、磺胺喹噁啉(SQX)和磺胺间二甲氧嘧啶(SDT)五种磺胺类兽药残留的方法，以解决现有技术中最低检出浓度高，不能有效排除基质干扰，容易出现假阳性且有机溶剂使用量大等缺点。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种功能性食品中五种磺胺类兽药残留的HPLC-MS-MS检测方法，包括如下步骤：

(1)样品提取：称取适量样品，乙腈作为溶剂涡旋振荡提取2-4次，合并乙腈液，置分液漏斗中待用；称样量为0.5克-10.0克，每次溶剂提取乙腈用量为5mL-100mL。

(2)样品净化：用正己烷萃取步骤(1)中所得乙腈液，底层乙腈液经浓缩后用10％乙腈水溶解，过滤；

(3)采取HPLC-MS-MS系统测定样品中五种磺胺类兽药残留量。

所述五种磺胺类兽药包括磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁啉和磺胺间二甲氧嘧啶。

所述步骤(3)采取HPLC-MS-MS系统测定样品中五种磺胺类兽药残留量，检测条件是：

色谱条件：

流动相是：

乙腈                          0-90体积份

0.05％-0.2％甲酸水溶液        5-95体积份

流速为0.3mL/min；进样量：5μL，柱温：35℃；

质谱条件：

电离方式为电喷雾电离，正离子(ESI+)；

毛细管电压：3.50kV；

离子源温度：110℃；