[发明专利]一种大叶茜草素的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种大叶茜草素的制备方法，属于天然药物领域，具体涉及一种利用大孔树脂和硅胶柱层析技术，从茜草中提取纯化大叶茜草素的方法。

背景技术：

茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根茎。始载于《神农本草经》，具有凉血、祛瘀、止血、通经的功效，用于吐血、衄血、崩漏、外伤出血、淤阻经闭、关节痹痛、跌扑肿痛。茜草主产于陕西渭南、河南嵩县、安徽、江苏、山东等地。目前，已知茜草中含有多种蒽醌类成分、萘醌类成分、环六肽成分，其中萘醌类成分为茜草类药材的特征性成分。茜草有显著的止血、抑菌、消炎作用，大叶茜草素是其主要有效成分之一，体外实验表明，茜草素对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和克雷伯氏菌等均有显著的抑制作用。刘广等发现甲醇溶液中的大叶茜草素在光照下不稳定，测定其含量应避光操作。谭朝阳通过实验发现三七总皂苷、三七素、大叶茜草素是三七、茜草治疗宫环出血的主要有效部位，三七总皂苷、三七素、大叶茜草素均能使家兔子宫匀浆6-K-PGF_1a/TXB₂比值明显降低，而三七、茜草提取后的剩余物无相应作用或作用较弱。尤昭玲等的实验发现SQ重组复方能改善置Cu-IUD家兔子宫内膜血管内皮细胞及平滑肌细胞线粒体水肿及空泡变，改善间质细胞的泡沫样变，体外实验表明，其中的有效组分大叶茜草素对花生四烯酸、胶原诱导的兔血小板聚集有较强的抑制作用，对血小板激活因子诱导的血小板聚集也有抑制作用，在另一组实验中发现实验中的模型组家兔红细胞比容、全血黏度(低切、中切、高切)、血浆黏度都显著提高，与空白对照组差异有显著性(P＜0.01)，分别经三七总皂苷、三七素、大叶茜草素及吲哚美辛治疗后均可降低以上指标，并且三七总皂苷、三七素、大叶茜草素与阳性对照组药物同样使所测指标达到正常，均具有治疗作用；因此，三七总皂苷、三七素、大叶茜草素是SQ复方有效部位，通过调节血液流变性，达到去瘀生新的止血作用。

目前国内对大叶茜草素提取纯化工艺研究方面文献较少，谭朝阳、刘倩、彭亮等均采用乙醇回流提取，该方法仅得到茜草粗提物，无法得到高含量的大叶茜草素。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种大叶茜草素的制备方法，可得到高含量的大叶茜草素。该方法对环境要求不高，成本低，操作简单，易于控制，适合于从茜草中工业化制备提取该化合物。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种大叶茜草素的制备方法，包括下列步骤：

a.将茜草根及根茎粉碎，加入有机溶剂进行提取，提取两次，过滤，保留滤液，浓缩；

b.用水悬浮，加入大孔吸附树脂柱吸附，80-100％甲醇或乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干；

c.上述浓缩物采用硅胶柱层析分离纯化，石油醚-乙酸乙酯、石油醚-甲醇或正己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，收集流分，根据TLC跟踪监测将相同流分合并；

d.将大叶茜草素流分减压回收试剂，浓缩至干，二氯甲烷-丙酮重结晶得到大叶茜草素纯品。

所述步骤a.中有机溶剂选自丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲醇中的一种或几种。

所述步骤a.中提取方法可选微波提取、超声提取、加热回流提取、渗漉提取或索氏提取中的一种。

所述步骤b.中大孔树脂可选XSD-1、D101、AB-8、HPD100等非极性或弱极性树脂。

所述步骤c.中洗脱剂体积比为49∶1-2∶1。

本发明制备方法简单，成本低、选用树脂吸附，富集量大，除杂效果好，能耗低，避免高温发生结构变化；采用硅胶柱分离效果好。

具体实施方式：

下面的实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1：

以陕西产茜草为原料，取10kg，用90％丙酮索氏提取，过滤，取滤液，将药渣再重复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入D101大孔吸附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，再用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-乙酸乙酯为系统溶剂进行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49∶1、19∶1、9∶1、2∶1，收集洗脱液，每500ml为一个流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结晶，真空干燥得43.2g大叶茜草素，含量为90.36％。

实施例2：