[发明专利]一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法和抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物化合物领域，具体涉及一类源于真菌的具有抗肿瘤活性的降倍半萜过氧化合物及其制备方法，以及这类降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

海洋占地球表面积70%，海洋微生物无论从数量上或是多样性方面都相当丰富，美国“国际海洋微生物普查”项目首席科学家米切尔·索金最近公布，海洋微生物的总量应在500～1000万种，远远超出原来20万种的估计，也远远超出全球动植物种类的总和。

海洋微生物生活在特殊环境之中，例如高盐度、高压、低营养、低温（特别是深海）或局部高温和无光照以及不同的生物之间的关系等等。在这些所谓生命的极限环境中，海洋微生物已发展出独特的代谢方式，这不仅确保其在极端环境中生存，也提供了在陆地微生物中未遇到过的代谢产物的生产潜力，因而是多种多样新颖化合物的极好资源。科技界相信，海洋微生物将成为21世纪开发新型医药品的资源。

红树林生态系是世界上最富多样性、生产力最高的海洋生态系之一。红树林沼泽区有充足的植物材料，有丰富的浮游藻类和浮游生物，这些条件正适合于微生物的繁殖。在过去的十几年里，红树林栖息地被证明是真菌新种属的丰富来源，这形成了海洋真菌第二大的生态学亚类。

自从1929年从真菌中发现青霉素以来，真菌的代谢产物成为了药物的丰富来源，它们在抗菌，抗肿瘤，治疗心血管疾病，免疫调节剂等有重要应用。海洋微生物种类繁多，来源广泛，筛选获得率高，根据John教授在2008年《Natural Product Reports》的报道， 2006年发现海洋天然产物新化合物中，海洋微生物是主要来源之一，成为当今国际上研究的热点。

发明内容

本发明的目的在于提供来源于海洋红树林内生真菌的一类降倍半萜过氧化合物。

本发明的另一个目的是提供上述降倍半萜过氧化合物的制备方法。

本发明的又一目的是提供上述降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

发明人由南海海洋真菌 Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No: M 2010266的发酵培养物中提取分离得到一类降倍半萜过氧化合物，结构式如（Ⅰ）或（Ⅱ）：

本发明所用的真菌Talaromyces sp. HN21-3C，已保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC，中国 武汉大学校内），保藏号为CCTCC No：M 2010266，保藏日为2010年10月15日。

上述降倍半萜过氧化合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）真菌Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No: M 2010266的种子培养；

（2）真菌Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No: M 2010266的发酵培养；

（3）将步骤（2）得到的发酵液和菌体离心，除去发酵液，得到菌丝体；

（4）将菌丝体用有机溶剂萃取，浓缩萃取液，得到浸膏，对浸膏进行色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚洗脱液；

（5）将步骤（4）得到的洗脱液以30%的乙酸乙酯-石油醚为洗脱液进行凝胶柱层析分离，重结晶纯化，得到化合物Ⅰ和Ⅱ。

其中，步骤（1）所述种子培养，培养基组成及重量份数为：葡萄糖0.3～2.5，酵母提取物0.03～0.2，蛋白胨0.1～0.5，琼脂1.5～2.5，氯化钠1.5～4，水100；制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，28～35℃培养7～10天。

步骤（2）所述发酵培养，发酵培养基组成及重量份数为：葡萄糖0.5～5，酵母提取物0.2～1，蛋白胨0.5～2，氯化钠1.5～5，水100，将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基，于25～35℃静置1～2个月。

步骤（4）中所述有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯或丙酮。

上述降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤为乳腺癌、前列腺癌、子宫颈癌或肝癌。

本发明经试验证明，降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ能有效抑制多种肿瘤细胞株的生长，可用于制备抗肿瘤药物，可以是药物上可接受的任意一种剂型。

与现有抗肿瘤药物相比，本发明具有如下有益效果：本发明的降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ来源于海洋真菌，海洋真菌种类繁多、数量庞大，从真菌提取的方法简单，使得降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ来源丰富、成本低廉；降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ抗肿瘤活性高，应用前景广阔。