[发明专利]一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法

权利要求书

1.一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，是采用阴离子交换柱分离纯化谷氨酰胺转胺酶。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阴离子交换柱为Hitrap Q HP。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阴离子交换柱用pH 8.5的Tris-HCl平衡，用0-0.4 mol/L氯化钠进行线性梯度洗脱。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤如下：

1）将发酵液去除菌体得到的上清液经过硫酸铵分级沉淀，收集的蛋白沉淀溶解后进行透析；

2）将透析后的酶液加入到用pH 7.5的Tris-HCl平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中，用0-1 mol/L氯化钠线性梯度洗脱，收集活性部分；

3）将收集的活性部分用硫酸铵浓缩，将浓缩后的酶液加入Superdex 75 10/300GL层析柱中，用0.15 mol/L氯化钠洗脱并收集活性部分；

4）将收集到的活性部分加入到用pH 8.5的Tris-HCl平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中，用0-0.4 mol/L氯化钠进行线性梯度洗脱，收集活性部分。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）硫酸铵沉淀

将吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus发酵液离心去除菌体后，上清液中加入硫酸铵粉末，至饱和度为50%，缓慢搅拌使其完全溶解，调节pH值，使酶液的pH保持在7.5，静置半小时后10000×g低温离心10 min，收集上清液继续加入硫酸铵至饱和度为80%，4℃静置数小时后，低温离心收集蛋白沉淀，将沉淀溶解在20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液中并且4℃透析数小时；

2）第一次离子交换层析 

将透析后的酶液加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中，用含0-1 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长为280 nm，收集有活性的部分；

3）凝胶过滤层析 

将收集到的全部活性部分用硫酸铵（饱和度80%）浓缩并用少量Tris-HCl pH 7.5缓冲液溶解，将浓缩后的酶液加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5缓冲液平衡好的Superdex 75 10/300GL层析柱中，用含0.15 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行洗脱，流速为0.4 mL/min，检测波长为280 nm，收集有活性的部分；

4）第二次离子交换层析 

    将收集到的活性部分经20 mmol/L Tris-HCl pH 8.5的缓冲液透析后再次加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 8.5缓冲液平衡好的Hitrap Q HP离子柱中，用含0-0.4 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，收集活性部分。

6.如权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，出发菌株为吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）WSH03-13。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述吸水链霉菌WSH03-13培养方法为：30℃，200 r/min培养60 h。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述吸水链霉菌WSH03-13发酵培养基为：糊精20 g/L，蛋白胨 20 g/L，酵母提取物 5 g/L，CaCl₂ 1 g/L，MgSO₄ 2 g/L，K₂HPO₄ 2 g/L，KH₂PO₄ 2 g/L。