[发明专利]一种测定硫酸庆大霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及硫酸庆大霉素的测定方法，特别是四羧基铝酞菁褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方法。

背景技术

硫酸庆大霉素(Gentamycinsulfate，GEN)属氨基糖苷类抗生素，具有水溶性好、抗菌谱广、细菌耐药性低、血浆蛋白结合率低、用药方便和价格便宜等优点，是临床上常用的抗感染药物，但这类抗生素对耳、肾有一定的毒性，临床使用时需严格控制剂量，因此对硫酸庆大霉素的定量测定具有非常重要的意义。这类抗生素的含量测定多采用微生物法，但这种方法繁琐、费时、费用高，不适于快速检测。此外的测定方法还有高效液相色谱法、荧光法和分光光度法等。由于分光光度法具有方法简便、分析精度高、重复性好、可测范围广、仪器价廉等优点，是药物分析中应用较多的一类方法。四羧基铝酞菁(AlC4Pc)是一种性能优异、对光和热有较好稳定性的物质，作为光度试剂可测定蛋白质，但目前应用四羧基铝酞菁为指示物，以褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种四羧基铝酞菁褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方法。

具体步骤为：

于10mL比色管中依次加入0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5mL 8～11μg/mL的硫酸庆大霉素溶液，0.05～1.5mL pH6.6的克拉克-鲁布斯(Clark-Lub’s C-L)缓冲溶液，0.5～2.0mL 0.9～1.1×10^-4mol/L的四羧基铝酞菁溶液，以不加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀。于紫外可见分光光度计上，用1cm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在波长690nm处分别测定含硫酸庆大霉素溶液的吸光度值A_690nm和试剂空白的吸光度值A₀，计算吸光度差值ΔA_690nm＝A₀-A_690nm值，其吸光度差值ΔA_690nm与硫酸庆大霉素浓度C在0.1～2.5μg/mL范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔA_690nm＝0.2896C+0.0052，相关系数0.9998，检出限0.087μg/mL；另取硫酸庆大霉素注射液1～2mL，稀释后同法测定吸光度值，计算出硫酸庆大霉素注射液中硫酸庆大霉素的含量。

本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便、快捷、仪器价廉。

附图说明

附图为本发明实施例空白与1.0μg/mL硫酸庆大霉素的紫外吸收光谱图。

图中标记a：空白；b：1.0μg/mL GEN-pH6.6C-L-1.0×10^-5mol/L AlC₄Pc。

具体实施方式

实施例：

于10mL比色管中依次加入0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5mL 10μg/mL的硫酸庆大霉素溶液，0.5mL pH6.6的克拉克-鲁布斯(Clark-Lub’s，C-L)缓冲溶液，1mL 1.0×10^-4mol/L的四羧基铝酞菁溶液，以不加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀。于紫外可见分光光度计上，用1cm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在波长690nm处分别测定含硫酸庆大霉素溶液的吸光度值A_690nm和试剂空白的吸光度值A₀，计算吸光度差值ΔA_690nm＝A₀-A_690nm值，其吸光度差值ΔA_690nm与硫酸庆大霉素浓度C的线性回归方程为：ΔA_690nm＝0.2896C+0.0052，相关系数0.9998，检出限0.087μg/mL；另取三批硫酸庆大霉素注射液各一支，各自取1mL分别放入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。各取2.5mL分别放入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别取1mL上述溶液进行测定，并进行回收率实验，结果见表1。

表1硫酸庆大霉素注射液测定结果(n＝5)