[发明专利]由复合MSC的PLGA和MSC组成的制剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及由复合MSC的PLGA和MSC组成的制剂及其应用。

背景技术

由疾病、创伤所致的骨、软骨缺损是临床常见且较难医治的病症，而各种原因造成的关节软骨缺损以及因自身缺乏有效的修复能力，造成损伤后常引起疼痛和关节功能障碍等。间充质干细胞(MSC)为骨缺损的治疗提供了广阔的前景。

MSC来源广泛，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，具有自我更新和增殖能力，在适宜的微环境中具有多潜能分化特性。基于MSC具有易获得、易培养、方便运输、低免疫原性、免疫调节特性、能在宿主体内长期存活、易于外源基因转染和转染后外源基因可以稳定表达等优点，其已成为组织工程、细胞移植、基因治疗及器官移植等领域的理想种子细胞。将MSC作为种子细胞与支架材料复合之后移植到创伤部位，被认为是现今最好的修复骨缺损的方法之一。

支架材料不仅要具有临床使用时所需要的理化性能，还必须具有生物安全性，组织相容性等基本特性，以保证其使用的安全性，聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)为常用的生物材料。有大量研究报道表明，MSC与生物材料相复合，在体内可以向成骨、软骨组织分化。但是仍然存在一些不足，目前利用MSC来促进组织工程骨的研究，基本上是自体细胞移植，从而产生了许多局限性：自体MSC来源有限；增加机体创伤；体外扩增需要一定时间而难于应用于急诊手术等。MSC具有低免疫原性及免疫调节能力，提示MSC可用于异体移植，而异体MSC移植是否存在安全问题，其在体内引起怎样的免疫反应变化等目前还没有明确的结论。

国内曹颖光等发现大鼠MSCs可在PLGA上黏附、增殖、分泌胞外基质，并可在成骨诱导剂的作用下分化为多角形的成骨样细胞；杨等将脂肪来源的自体MSC扩增后与PLGA材料复合，体内移植后成功修复了兔关节软骨损伤。但是关于生物工程骨在体内引起的免疫反应还没有报道，生物工程骨移植后成功率也是潜在的问题。并且，组织工程骨要在临床推广应用也必须实现产业化生产、降低移植物成本，也要考虑异体细胞的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于减轻生物材料复合骨片异体移植免疫反应的制剂。

本发明提供的用于减轻生物材料复合骨片异体移植免疫反应的制剂的活性成分是如下单独包装的物质1)和2)：

1)由间充质干细胞和聚乳酸聚乙醇酸复合而成的生物材料复合骨片片；

2)离体的间充质干细胞。

优选的是物质1)和2)中的间充质干细胞是相同来源的。

物质1)中，所述生物复合骨片的制备方法包括如下步骤：将所述间充质干细胞滴加到所述聚乳酸聚乙醇酸上，在35℃-40℃和4-6％CO₂培养条件下培养1.5-3小时。

进一步，上述培养条件是37℃和5％CO₂；培养时间为2小时。

上述间充质干细胞与所述聚乳酸聚乙醇酸的配比是：长5mm、宽5mm、厚1-2mm的聚乳酸聚乙醇酸上复合10⁵-5×10⁵个间充质干细胞。

进一步讲，上述间充质干细胞与所述PLGA的配比是：长5mm、宽5mm、厚1-2mm的聚乳酸聚乙醇酸上复合2×10⁵间充质干细胞。

本发明的另一目的在于提供另一种用于减轻生物材料移植免疫反应的制剂。

本发明提供的另一种用于减轻生物材料移植免疫反应的制剂的活性成分是如下单独包装的物质a)和b)：

a)聚乳酸聚乙醇酸；

b)离体培养的间充质干细胞。

物质a)中，所述聚乳酸聚乙醇酸是长5mm、宽5mm、厚1-2mm。

实验证明：材料生物复合骨片异体皮下移植1周后，可以看到生物材料复合骨片移植体区域(M+P)与相应的单纯材料移植组(P)相比，并没有减少炎性细胞浸润，主要为淋巴细胞浸润，而尾静脉输注MSC(M+P-C，P-C)后，发现降低了炎性细胞的浸润；取移植后1周各组小鼠脾脏，做病理切片，HE染色分析。观察到生物材料复合骨片移植体区域(M+P)以及单纯材料移植组(P)的脾小结较大，较多，而输注MSC(M+P-C，P-C)后脾小结相应减小和减少，MSC输注亦降低了CD3⁺T淋巴细胞早期活化指标CD69的比例。由此可见，我们建立了一种间充质干细胞静脉输注来减轻生物材料复合骨片异体移植所引起的免疫反应的方法。

附图说明

图1为PLGA材料细胞接种率。

图2为检测成骨诱导间充质干细胞和PLGA材料生物复合骨片ALP活性。