[发明专利]禽流感病毒H5N1亚型Re-5株阳性血清和阴性血清标准物质及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种禽流感病毒H5N1亚型Re-5株的阳性血清和阴性血清标准物质及制备方法，属于兽用生物制品领域。 

背景技术

英国药典(BP)的化学对照物质是从1963年才开始提出，由于WHO在英国建立了国际生物标准物质中心，所以英国一直沿用国际标准物质，而其本国标准物质建立较晚，至1970年后，欧洲药典问世，英国除引用国际标准物质外，也用欧洲药典标准物质，少量使用本国的标准物质。即使如此，BP1968年版及其增补本再加英国药典(1968年)收载的数量已超过260个，1980年版已超过300个，BP1993版收载了371个。美国药典委员会可提供约1805多种药品标准物质；欧洲药典委员会有2098种，其中生物制品标准物质有319种。 

目前，我国已研制出国家一级标准物质1262种，二级标准物质1739种，涉及钢铁、地质、石油、核材料、环境、食品以及临床检验等领域。兽用生物制品的标准物质研究较滞后，目前只有192种，而兽用生物制品检验用标准物质几乎为零。 

兽用生物制品标准物质是控制和确定兽用生物制品产品质量、校准验证检验仪器和方法是否准确的物质标准，是正确诊断传染病、准确监测免疫情况的物质基础。 

禽流感(AI)是我国重点防控的重大动物疫病，禽流感病毒(AIV)H5亚型属于高致病性病毒，AIV H5N1亚型Re-5株是针对我国当前流行的高致病性禽流感病毒而研制的。用该毒株研制的禽流感灭活疫苗是我国目前禽流感防制中应用最广泛的首选疫苗，这个疫苗在实际应用中取得了十分显著的免疫效果，因此近年来我国的禽流感防制非常令人满意。但是目前我国尚无禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验用标准物质及其相关研究的报道，国外国际动物卫生组织(OIE)等参考实验室也没有，严重影响了前后不同时期检测数据的一致性和不同实验室数据的可比性。近年各级实验室对禽流感标准物质的需求越来越多，特别是H5亚型和H9亚型相关的诊断试剂标准物质，因此研制禽流感病毒H5N1亚型血凝抑制抗原标准物质尤为迫切，该标准物质是禽流感H5N1亚型准确诊断、对AIV H5N1亚型Re-5株免疫监测及对其疫苗免疫效果进行正确评价的根本保障，提高禽流感的防控水平。 

目前我国标准物质的研制主要参考和遵循1987年7月10日国家计量局发布实施的《标 准物质管理办法》以及一级标准物质技术规范(JJG 1006-94)，但是这个技术规范是适用于化学成分、物理化学特性及工程技术特性一级标准物质的研制，对于生物制品标准物质，特别是兽用生物制品标准物质研制目前尚无技术规范可循。因此兽用生物制品标准物质研制是一项无基础的研究，填补了该项研究领域的空白。 

发明内容

本方面涉及一种禽流感病毒H5N1亚型Re-5株阳性血清和阴性血清标准物质，阳性血清标准物质有强阳性血清标准物质和弱阳性血清标准物质，此两种阳性血清标准物质只与禽流感病毒H5N1亚型Re-5株抗原呈阳性反应，强阳性血清标准物质的HI价为≥8log2，弱阳性血清标准物质的HI价为＜8log2而≥4log2；此两种阳性血清与H7和H9亚型禽流感、鸡新城疫、减蛋综合征病毒抗原均应为阴性反应；阴性血清标准物质在同一条件下，分别与禽流感、鸡新城疫、减蛋综合征病毒抗原进行红细胞凝集抑制试验，血清对禽流感H5、H7、H9亚型、鸡新城疫、减蛋综合征病毒抗原均为阴性反应。 

本发明的技术方案： 

(1)禽流感病毒H5N1亚型Re-5株阳性血清和阴性血清标准物质候选物： 

1)按常规方法用禽流感病毒H5N1亚型Re-5株病毒制备的油乳剂灭活疫苗。 

2)阳性血清标准物质候选物系用青年或成年SPF鸡，经肌肉注射禽流感病毒H5N1亚型R5株油乳剂灭活疫苗，制备强阳性血清候选物，经2次免疫后，选取HI抗体效价≥8log2的免疫鸡只，分别采集鸡血清并进行半成品检验后混合，加入适宜稳定剂后冻干；制备弱阳性血清候选物仅1次免疫，选取HI抗体效价＜8log2而≥4log2的免疫鸡只，分别采集鸡血清并进行半成品检验后混合，加入适宜稳定剂后冻干。 

3)阴性血清系采自SPF鸡血，分离血清并进行半成品检验，冻干。 

(2)以上制备的强阳性血清、弱阳性血清和阴性血清标准物质候选物经检验、均一性检验及稳定性检验及标准物质的标定、定值等一系列的工艺过程而成为强阳性血清、弱阳性血清和阴性血清标准物质。 

本发明技术方案的详细阐述 

一、禽流感病毒H5N1亚型Re-5株阳性血清、弱阳性血清和阴性血清标准物质的制备