[发明专利]液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法

权利要求书

1.一种液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法，步骤如下：

(1)设定操作条件：

I.取H₃PO₄-KH₂PO₄缓冲溶液-甲醇体系作为流动相，缓冲溶液/甲醇体积此V_缓冲溶液/V_甲醇＝75/25-85/15；

II.调节缓冲溶液pH：滴加浓磷酸至50mmol/L的KH₂PO₄水溶液中，调节pH＝3.4-4.4；

III.流动相流速为0.2-0.5mL/min；

IV.紫外检测器检测波长：200-310nm；

V.色谱柱：Agilent-Hypersil ODS 100×4.6mm，5um；

VI.Waters 515液相色谱仪，配Waters 2487紫外检测器；

VII.进样量：1-20ML；

(2)配制溶液：

I.配制内标液：准确称取无水对氨基苯磺酸50mg，置于容量瓶中，以流动相溶解并定容至刻度；

II.配制标样与样品溶液：

i.N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标准储备液：准确称取N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标样50mg，置于容量瓶中，以流动相溶解并定容至刻度；

ii.N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标准溶液：

分别移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标准储备液，并以流动相定容至10mL；配制成浓度分别为0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/mL的标准溶液；

分别准确移取2.5、3.5、4.5mL的N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标准储备液，并以流动相定容至10mL，配制成浓度分别为0.25、0.35、0.45mg/mL的标准溶液；

iii.N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品储备液：准确称取N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品50mg，置于50mL容量瓶中，以流动相溶解，并定容至刻度；

iv.N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品溶液：准确移取3.0mL的N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品储备液，并以流动相定容至10mL；

III.加内标物的混合液的配制：

移取步骤(2)I 配制的内标液0.5mL，加入0.5mL的步骤(2)II 配制的各浓度的N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标准溶液或样品溶液，配制成添加内标物的混合溶液；

(3)分析方法考察：

I.线性关系考察：以内标物与N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸标样的峰面积此Y＝A_i/A_s对标样的质量浓度C_i作图，绘制标准工作曲线，或者进行回归分析，拟合出线性方程式；

II.精密度与回收率试验：以标准加入法进行回收率试验，重复进样3-6次，测定结果的精密度；

(4)N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品测定：

取步骤(2)II.iv配制的N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品溶液注入液相色谱仪中，以步骤(3)所述的内标标准曲线法进行定量测定。

2.根据权利要求1所述的液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法，其特征在于：步骤(1)I中流动相缓冲溶液/甲醇体积此优选为80/20。

3.根据权利要求1所述的液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法，其特征在于：步骤(1)II中缓冲溶液的pH值优选为3.7。

4.根据权利要求1所述的液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法，其特征在于：步骤(1)III中流动相的流速优选为0.3mL/min。

5.根据权利要求1所述的液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法，其特征在于：步骤(1)IV中紫外检测波长优选为254nm。