[发明专利]α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，涉及中药中抑制α-葡萄糖苷酶活性组分的筛选方法，另外还涉及中药提取物的应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变，糖尿病患者迅速增加且呈低龄化趋势，糖尿病（Diabetes mellitus，DM）已成为严重威胁人类健康的主要慢性病之一。糖尿病检测的两个重要指标是空腹血糖水平和餐后血糖水平，流行病学研究表明，糖尿病发病过程中最先出现的症状往往是餐后高血糖，而且餐后高血糖较空腹血糖更容易引发各种并发症，也是葡萄糖耐受受损病人发展为Ⅱ型糖尿病的重要因素，因此控制餐后高血糖是预防和治疗糖尿病的重要措施。α-葡萄糖苷酶抑制剂（α-glucosidase inhibitors，α-GI）通过抑制小肠刷状缘上各种α-葡萄糖苷酶的活性，控制低聚糖和双糖的水解，降低餐后血糖浓度，减少高血糖对胰腺的刺激，提高胰岛素受体敏感性，且不导致低血糖，因此α-葡萄糖苷酶抑制剂多次被亚太地区糖尿病药物指南推荐为降低餐后血糖的一线药物；另外，α-葡萄糖苷酶抑制剂还可以治疗病毒感染、肿瘤、溶酶体贮积症、肥胖、高三酰甘油血脂症、肝炎等多种疾病。

目前，应用于临床的α-葡萄糖苷酶抑制剂都是生物合成或半合成药，种类少、价格贵、副作用大。我国有着丰富的中药资源和数量庞大的中药品种和处方，如：李时珍的《本草纲目》中记载的治疗消渴常用的中药有140余种，我国申报注册的抗糖尿病中成药有近40种。然而，药理明确的抑制α-葡萄糖苷酶活性的先导物或药物却很有限。因此，从传统中药中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂具有重要的研究价值。

高通量筛选（High Throughout Screening，HTS）是新药发现的重要步骤。通过筛选，可以发现中药中起治疗作用的活性成分，明确中药的作用靶点，是发展传统医药、实现中药现代化，推动新药研究的有效途径。目前，α-葡萄糖苷酶抑制剂体外筛选方法主要有对-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）法、葡萄糖氧化酶法和固定化酶法，但是大多采用分光光度法作为检测手段，试剂消耗大、重现性差，尤其对于复杂样品或有色素干扰样品的筛选，假阳性高，有的甚至在体内完全没有活性。

目前公开的关于α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选的专利，普遍应用分光光度计进行酶活的测定；组分库的建立上一般只针对某味中药的单一溶剂提取部位。例如，陈群等（申请号200810162970.6）通过微波加热法，将地榆经水提取后进一步脱蛋白、离心后从上清液中提取得到了具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的提取物；黄新立等（申请号02125869.4）将桑叶的水、醇或水醇混合液提取物通过阴阳离子交换树脂或大孔树脂得到了α-葡萄糖苷酶抑制剂；吴慧平等（200710131472.0）对夏枯草水提取及流浸膏进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选。

发明内容

本发明提供一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法，方法简单合理，易于操作，筛选出了具有显著抑制效果的活性组分。本发明的另一目的是提供α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用，将单个活性部位或多个活性部位组合应用于以抑制α-葡萄糖苷酶为目的的药品或保健品的研发。

本发明为实现上述目的采用的技术方案是：α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选，具体分三步：

1）体外筛选模型的建立

建立α-葡萄糖苷酶和底物PNPG的体外反应模型，应用HPLC检测水解产物PNP，通过PNP的浓度变化，计算每个提取部位对α-葡萄糖苷酶的抑制率；

（2）组分库的建立

选取一定数量的对糖尿病治疗有显著效果的中药，根据“相似相容”原理，按照极性由小到大，用多种（≥2）溶剂对每味中药进行系统提取，采用这种方法，每味中药获得多个提取部位，本发明优选5种溶剂，分别是正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水；

（3）筛选

将中药的各个提取部位配成一定浓度的溶液，加入到反应模型中反应并计算抑制率；由于不同中药组分的抑制活性相差较大，对于抑制活性较高的组分，浓度稀释后按照相同的方法进行复筛，直到筛选出抑制活性较高的活性部位；

本发明α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用，所选中药提取部位在制备对α-葡萄糖苷酶有抑制效果的中药或食品中的应用；特别是在制备降低餐后血糖、治疗或预防糖尿病及糖尿病并发症的药物或食品中的应用。