[发明专利]一种制备抗番鸭细小病毒血清的方法

权利要求书

1.一种制备抗番鸭细小病毒血清的方法，所述的制备方法包括以下步骤：

1）从病变的番鸭中获得番鸭细小病毒；

2）制备一免番鸭细小病毒抗原；

3）制备二免番鸭细小病毒抗原；

4）用二免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗；

5）用一免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗；

 6）用制备得到的抗原与疫苗免疫番鸭，得到抗番鸭细小病毒的血清。

2.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于：步骤1）所述的番鸭细小病毒的制备方法包括以下步骤：

A、在无菌的条件下取有典型病变的病鸭的心脏、肝脏、胆囊、肾、脾、胰腺、肠道、十二指肠、直肠，放入组织机捣碎；

B、取粉碎的组织，加入75%生理盐水混匀得到组织悬液，其中粉碎的组织占组织悬液总重的10%～20%，生理盐水占组织悬液总重的80～90%；

C、取组织悬液放入-20℃～-40℃冰箱中冷冻，使组织液完全冻结为止，然后迅速放入37℃-40℃水浴锅中融化，反复冻融3～5次；

D、将反复冻融后的混悬液离心；

E、取离心后的上清液用孔径为0.22 um的滤菌膜过滤；

F、取除菌后的滤液，分别按每毫升滤液中加入2000单位-2500单位（青霉素和2000单位-2500单位链霉素，然后放入0～4℃冰箱中备用。

3.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于：步骤2）所述的一免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤：

A、用浓度为0.75%的生理盐水中稀释步骤1）制备得到番鸭细小病毒， 稀释100倍，得到稀释液，

B、用0.1ml-0.2ml的剂量接种12～14日龄的鹅胚的绒毛尿囊腔中；

C、接种后选取在48～120h之间具有胚体有广泛出血，毛囊出血，肝脏变性和坏死，绒毛尿膜有轻度水肿的鹅胚，取其尿囊液；

D、在每毫升尿囊液中加入2000单位-2500单位的青霉素和2000单位-2500单位链霉素，即形成为一免番鸭细小病毒抗原，并将放入冰箱中在0～4℃条件下储藏备用。

4.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于：步骤3）所述的二免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤：

A、取一免番鸭细小病毒抗原制备中经接种番鸭种毒后死亡的鹅胚体放入组织捣碎机中粉碎，取粉碎后的组织加入生理盐水混合，其中粉碎的组织占组织悬液总重的10%～20%，生理盐水占组织悬液总重的80～90%；

B、将混合组织悬液进行离心；

C、取离心后的上清液，在上清液中按每毫升分别加入2000单位-2500单位的链霉素和2000单位-2500单位）青霉素，

D、再加入总重的0.5%-0.4%的甲醛，制成灭活疫苗，即为二免番鸭细小病毒抗原，放入0～4℃冰箱备用。

5.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于：步骤4）所述的番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗的制备方法包括以下步骤：按照佛氏不完全佐剂：二免番鸭细小病毒抗原=1:1的比例进行充分混合，即得到番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗。

6.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于：步骤5）所述的番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗的制备方法包括以下步骤：按照佛氏完全佐剂：二免番鸭细小病毒抗原=1:1的比例进行充分混合，即得到番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗。

7.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于：步骤6）所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法包括以下步骤：

A、选择健康无病的20日龄的番鸭，用一免佛氏完全佐剂疫苗在其颈部、腿部皮下进行多点注射，注射量均为1ml-2ml；

B、7天后用二免佛氏不完全佐剂疫苗进行皮下、腿部多点注射，注射量均为1ml-2ml；

C、再经7天后用不加佐剂的二免抗原进行皮下、腿部三免，注射量均为1ml-2ml；

D、三免注射后每隔5天采血一次，并进行抗体效价的检测，30天后当抗体效价在1：64～1：128范围时，在无菌条件下采集番鸭血；

E、将采集的血放入无菌容器中进行自然分离，吸取血清；

F、在得到的血清中加入1000单位-2000单位的青霉素和1000单位-2000单位链霉素，同时加入血清总重量1/10000的柳硫汞，即得到抗番鸭细小病毒的血清；

G、将得到的抗番鸭细小病毒的血清分装，经无菌检验、安全检验、效力检验和抗体效价检测后，冷冻保存。