[发明专利]高通量基质辅助激光解析-质谱法筛查奶类制品中β-内酰胺酶类解抗剂

权利要求书

1.一种奶类制品中β-内酰胺酶类解抗剂的高通量基质辅助激光解析-质谱法检测分析方法，其特征是对β-内酰胺酶催化奶类制品中含β-内酰胺环底物进行开环反应过程的检测，通过高通量基质辅助激光解析-质谱法检测方法分析开环产物的相对生成量，来反映奶制品中含有的β-内酰胺酶量的高低；所述的β-内酰胺酶底物是文斯内酯、青霉素类抗生素、头孢菌素类抗生素、头霉素类抗生素或头孢菌素类抗生素。

2.根据权利要求1所述的奶类制品中β-内酰胺酶类解抗剂的高通量基质辅助激光解析-质谱法检测检测分析方法，其特征是将奶制品样品采用高速离心方法进行前处理；通过β-内酰胺酶底物的开环产物量来反映奶制品中含有的β-内酰胺酶浓度；β-内酰胺酶底物的开环产物通过高通量基质辅助激光解析-质谱法检测方法进行定性和相对定量分析；所述的β-内酰胺酶底物是文斯内酯、青霉素类抗生素、头孢菌素类抗生素、头霉素类抗生素或头孢菌素类抗生素。

3.如权利要求1或2所述的奶类制品中β-内酰胺酶类解抗剂的高通量基质辅助激光解析-质谱法检测检测分析方法，其特征是所述的β-内酰胺类底物的酶催化的水解开环反应，通过下述步骤实现：(1)将β-内酰胺酶标准品溶液用10mmol·L^-1Tris-HCl pH 7.0稀释至6×10^-5，6×10^-4，6×10^-3，6×10^-2，6×10^-1U·mL^-1；(2)将奶制品样品采用高速离心方法进行前处理，取中间层的含有β-内酰胺酶的底物用10mmol·L^-1Tris-HCl的pH 7.0缓冲液稀释成1.0mmol·L^-1的β-内酰胺酶底物溶液；(3)将上述(2)的含有β-内酰胺类抗生素的底物溶液与(1)的β-内酰胺酶溶液各10μL混合，15℃-35℃下反应2-6h；然后将反应溶液直接进行高通量基质辅助激光解析-质谱法检测检测；所述的Tris是三羟甲基氨基甲烷。

4.如权利要求2所述的奶类制品中β-内酰胺酶类解抗剂的高通量基质辅助激光解析-质谱法检测检测分析方法，其特征是所述的检测牛奶样本中的β-内酰胺酶时，将牛奶与青霉素溶液(0.1-10mmol·L^-1)以体积比8∶1-2∶1混合，25℃反应2-6h；将反应后的溶液室温下10000rpm转速离心10-25min；取转速离心后的中间的澄清溶液点样，直接进行高通量基质辅助激光解析-质谱法检测检测分析。

5.如权利要求1或2所述的高通量基质辅助激光解析-质谱法检测分析，其特征是所述的高通量基质辅助激光解析的激光能量控制在幅值的20～30％，质量扫描范围100～500Da；使用聚乙二醇PEG-200与PEG-400做质量校正，所述的PEG-200和PEG-400用v/v＝1/1的甲醇/水溶液配成10μg·μL^-1溶液使用；以二羟基苯甲酸(DHB)溶于等体积比混合的水/甲醇溶液，配成150mg·mL^-1的溶液作为基质溶液，吸取1μL基质溶液点于样品靶上，自然风干后点1μL样品溶液，自然风干，将样品靶放入离子源进行高通量基质辅助激光解析-质谱法检测。